今天,我们来探讨一个重要的话题,那就是胚胎冷冻有什么区别和冻囊胚和鲜囊胚的区别的相关内容,对于这些内容相信大多数朋友都不是很了解,下面,佳运育儿网小编就带大家一起来了解一下吧。
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关键词:胚胎冷冻;转基因小鼠;胚胎移植
随着生物工程技术的发展.出现了许多生物工程小鼠品系.促使胚胎冷冻技术得到了广泛应用。胚胎冷冻技术不仅为转基因动物提供可用胚胎.还使胚胎移植不受时间、地域限制。简化引种过程.防止疾病传播。为建立优良动物的胚胎库提供了条件。综述了几种常用的胚胎冷冻方法及其在转基因小鼠中的应用研究.指出了胚胎冷冻方法存在的主要问题,并展望了其发展
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2008-5-1 21:41
胚胎冷冻技术是一种简单、实用、经济而可靠的保种方法,它能降低动物饲养和繁育成本,扩大动物品系的保存能力,也可随时为其它胚胎工程技术如胚胎移植、胚胎分割、体外受精、动物性别控制、转基因动物技术和胚胎干细胞技术等提供可用胚胎。通过建立胚胎库,可以在世界范围内运送胚胎,从而取代活体运输,既降低了费用又可避免疾病的传播,还能解决遗传漂变以及人为、环境因素造成的动物生物学特征和遗传特性的改变等问题。
1胚胎冷冻技术
胚胎冷冻技术是对体内或体外受精所得到的可供移植的胚胎进行冷冻,并根据需要解冻后供移植的一种生物技术。胚胎冷冻技术的发展经历了由繁到简的过程,主要围绕程序简化、缩短冻存时间、选择低温保护剂及冷冻方法、解冻方法等方面进行研究,所选方法和程序的目的都是尽可能减少胚胎在冷冻时的物理损伤,提高胚胎冷冻/解冻后的存活率和移植妊娠率,并产下健康的后代。
1.1冷冻方法
(1)程序冷冻法
程序冷冻法主要使用渗透较慢的低温保护剂,如乙二醇(EG)、丙二醇(PG)、甘油(G)、二甲基亚砜(DMSO),使冷冻保护剂充分渗透人胚胎细胞内,平衡后,利用程序降温仪缓慢降温,最后投入液氮保存。1972年,Whittingham等首次报导了小鼠胚胎在-196℃和-269℃冷冻保存获得成功,引起了科学界的广泛重视。随后相继应用这种方法在牛、兔、绵羊、大鼠、山羊和马等多种哺乳动物上获得成功。
程序冷冻法采用较低浓度的冷冻保护剂,对胚胎毒性损害小,解冻后存活率较高。但因其操作繁琐,降温速度慢,致使所需时间长,需要特殊的降温装置,在不具备实验条件的场所不能使用此法进行胚胎冷冻。目前国内外均较少使用。
(2)玻璃化冷冻法
玻璃化冷冻法是将胚胎或卵母细胞在适当的冷冻保护剂混合液中做短暂处理后,直接投入液氮。与传统的程序冷冻法相比,玻璃化冷冻法的优点主要在于:细胞和液氮直接接触,冷冻速率明显增加;方法简单,缩短了冷冻程序的时间;免除了昂贵的程序降温仪的费用,在一般的实验室就可进行操作。下面介绍几种常用的玻璃化冷冻法。
①超快速冷冻法
l985年,Rail等首次应用DMSO、乙酰胺、丙二醇、聚乙二醇组成的玻璃化溶液超快速冷冻小鼠胚胎获得成功。1986年,Scheffen等以25%甘油和25% 1,2一丙二醇玻璃化超快速冷冻牛胚胎,降低了玻璃化溶液的毒性;同年,Kasai等以40%乙二醇、0.5 mol/L蔗糖和30 Ficoll的混合溶液超快速冷冻小鼠胚胎。获得了较高存活率(98%),进一步降低了玻璃化溶液的毒性;2002年,朱士恩等应用以EG和DMSO为主体的抗冻保护剂玻璃化冷冻小鼠原核胚,移植后妊娠率和产仔率与鲜胚的效果相近。2003年,Fujio等以DAP213(2.0 mol/LDMSO+1.0 mol/l乙酰胺+3.0 mol/L丙二醇)为冷冻保护剂冷冻小鼠获得成功;2005年,Baranyai等分别用SSV(Solid surface vitrification)法和麦管法冷冻小鼠8一细胞期胚胎,证明了SSV法对于桑椹胚和胚泡阶段的胚胎是一种较好的冷冻方法。
②开放式拉长塑料细管法(open pulled straws,OPS)
OPS法是丹麦人Vajta于1997年发明的,他使用薄壁细管,利用毛细现象将微量冷冻液滴和胚胎一起吸人管内后,投入液氮。这种方法克服了传统玻璃化的缺点,加快了冷冻速度和复苏速度,其降温速率可达2 500℃/min,且对细胞的毒性和损伤作用较小。1998年,Vajta等应用OPS法冷冻牛不同阶段的胚胎,结果表明,受精后3~7 d的胚胎复苏后囊胚形成率为60~95%,和新鲜胚胎无显著差别,且牛卵母细胞复苏后囊胚形成率高达25%,移植后产生3个仔牛。Lazar等应用OPS玻璃化法冷冻了117个牛囊胎,复苏后孵化率为39.5%,移植率和妊娠率分别为16.7%和50%,均显著高于普通麦管玻璃化冷冻。朱亮等应用OPS法和传统麦管法对小鼠扩张囊胚进行玻璃化冷冻,结果表明,应用OPS法冷冻小鼠囊胚存活率(82.3%)显著高于应用传统麦管者(68.6%),且前者的冷冻囊胚孵出率(70.3%)也明显高于后者(57.1%),因此认为OPS法是一种行之有效的冷冻方法。但是OPS法也存在一些不足,由于冷冻液与液氮直接接触,液氮里的一些潜在的污染源会增加污染的机会。
③封闭式拉长塑料细管法(closed pulled straws,CPS)
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有图,拷不下,可能有新回复:http://dxy.ac.cn/wiki/thread-664-1-1.html
冷冻胚胎是保存生育功能的唯一成熟方法。冷冻胚胎的技术是将通过试管培育技术得到的胚胎,存置于零下196℃的液氮环境中,得到长时间保存。如果这个周期治疗失败,可以在以后的自然周期中解冻这些胚胎并进行移植。
将胚胎和冷冻液装入冷冻管中,经过慢速(第2-3天的胚胎)和快速(第5-6天的囊胚)两种降温方式使胚胎能静止下来并可在196度的液氮中保存的一种方法。若有剩余的质量较好的胚胎,可以冷冻保存,待以后自然周期或人工周期解冻后植入子宫腔内,将增加受孕的机会。
可用于一个超排卵周期得到的胚胎数量多,质量好,不能一次全部移植,可将多余的冷冻胚胎保存,以及发生严重卵巢过度刺激综合证的患者,不宜在治疗周期移植胚胎者,可将冷冻胚胎,待以后的自然周期或人工周期进行胚胎复苏移植。冷冻胚胎复苏临床妊娠率为48.28%,囊胚冷冻复苏临床妊娠率为63.48%。
扩展资料
冷冻胚胎的适用对象(适应症):
1、IVF(ICSI)治疗周期过程中胚胎移植后剩余可以利用的胚胎;
2、本治疗周期母体因子宫环境不适合怀孕(例如:发生严重卵巢过度刺激征或子宫内膜不佳等),也可先冷冻保存暂缓植入,待适当的时机再做解冻;
3、本治疗周期有发热、腹泻等全身性疾病不能移植的;
4、对于有可能丧失卵巢机能的病人(例如:要接受化学治疗、放射线治疗或切除手术等),也可选择冷冻胚胎来保存其生育能力。
参考资料来源:百度百科—冷冻胚胎
囊胚是胚胎经过优劣淘汰出来的,肯定比冻胚强,等级高的胚胎未必能够养出囊胚!
鲜胚就是成功配对后第三天直接移植,其质量以8细胞1级为最优,例:第一天分裂为2细胞,第二天分裂为4细胞,第三天分裂为8细胞,且无杂质的,为8细胞1级
冻胚就是将成功配对的胚胎进行冷冻,一般有两种情况进行冷冻,一是移植当日母体有数据部达标不适合移植,二是有多余胚胎则可转为冷冻,缺点:冻胚复苏有可能导致降级或损失。
囊胚就是在胚胎已经培养的情况下多培育2天,也就是共培养5天,但风险和损失很大的,因为毕竟是在模拟母体环境,不是真正的母体环境,所以折损率相对较大,但一旦成功的囊胚相对于其他成功率也较为高点,毕竟在那样的情况下能生存下来,证明他是非常坚强的
囊胚培养及囊胚移植的优点
1.保证胚胎的发育潜能:胚胎能否发育至囊胚与其自身的基因有关,当胚胎没有发育潜能或携带有异常的染色体和基因时,在延长培养的过程中可因自身发育异常而被自然淘汰,只有质量最好的胚胎才能发育成囊胚。
2.胎发育与子宫内膜更加同步化:囊胚期移植可提供更接近生殖生理的自然环境,具有较高的种植能力。
3.减少多胎妊娠的风险:由于囊胚移植的种植率高,因此可以减少移植胚胎数目,如果是优质囊胚,提倡单囊胚移植,可以低多胎妊娠率。
4.囊胚培养为分裂期胚胎活检,进行植入前遗传学诊断(PGD)提供了充足的时间。
囊胚培养的缺点
1.囊胚培养失败:囊胚培养要求条件高,由于实验室培养条件或胚胎自身原因,胚胎可能会停止发育或退化,导致没有胚胎可移植。
2.不能浪费较多的卵裂期胚胎:由于体外培养环境终究不是体内自然环境,延长培养时间,可能使一部分能够着床的卵裂期胚胎退化。
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