胚胎移植前诊断技术助孕？移植前内膜容受性评估

大家好，感谢邀请，今天来为大家分享一下胚胎移植前诊断技术助孕的问题，以及和移植前内膜容受性评估的一些困惑，大家要是还不太明白的话，也没有关系，因为接下来将为大家分享，希望可以帮助到大家，解决大家的问题，下面就开始吧！

什么是PGD或者什么是移植前遗传学诊断

植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)技术的发展给辅助生殖技术(assistedreproductivetechnology,ART)带来了福音。PGD指对诊断明确的疾病如染色体疾病、单基因疾病等在胚胎植入前进行针对性诊断。单基因疾病患者或者携带者可以通过单基因疾病PGD技术,植入不携带疾病基因的胚胎;染色体异常如相互易位、罗氏易位、倒位等导致反复流产的患者通过染色体PGD技术,植入染色体正常或平衡的胚胎以降低流产风险。高龄(advancedmaternalage,AMA)、反复流产(recurrentspontaneousabortion,RSA)、反复植入失败(recurrentimplantationfailure,RIF)、严重男性因素患者因为染色体非整倍体发生率增高,学术界提倡对这部分人群进行植入前遗传学筛查(preimplantationgeneticscreening,PGS),目的是筛查23对染色体非整倍体,降低流产风险,提高成功几率。但因为PGS导致异常胚胎的遗弃,可能使妊娠率、活产率降低,活检过程移除细胞损伤可能影响胚胎发育潜能,活检胚胎可能需要全部胚胎冷冻而增加了冷冻复苏风险等原因,在国际上引起了巨大争议。目前国内并没有PGS相关指南,亟需规范。本文对PGD/PGS争议及最新的指征进展进行综述。

1 PGD/PGS技术发展简史

早在上世纪70年代末期ART引起世界瞩目之时,就有学者提出通过该技术筛查异常胚胎以降低流产风险的设想。随后不同学者提出可通过活检极体、1~2-细胞卵裂球细胞或者几个滋养外胚层细胞进行染色体检测。1990年,英国学者进行了首例X连锁隐性遗传病PGD,卵裂球活检后通过PCR方法扩增Y染色体特异序列进行胚胎性别选择,植入女性胚胎,获得临床妊娠,开启了ART新纪元[1]。1992年双色荧光原位杂交法(fluorescentinsituhybridization,FISH)作为另一单基因疾病性别选择方案,应用X及Y染色体特异性探针进行性别选择,并且可检测X及Y染色体非整倍体[2]。1995年,基于非整倍体与女性高龄、流产的相关性,多色FISH-PGS登上PGD舞台[3],主要对高龄女性进行几条染色体的非整倍体筛查,开创了PGS时代,并得到了推广。但FISH技术探针数目有限,荧光PCR、全染色体染色等技术可同时进行数目较多(9~10)染色体的PGS检测,使人们有了更好的选择[4]。由于亚端粒探针的研究,相互易位PGD方法也开始发展[5],极大地降低了这部分人群的流产风险。各种单基因疾病的PGD方法也在这段时间进展迅速。2001年基因芯片、2002年比较基因组杂交法、2003年单细胞测序法、qPCR等全染色体筛查(comprehensivechromosomescreening,CCS)技术进入人们的视野。2004年后,基因芯片-PGS的报道开始增加,并于2010年后成为国际上大多数生殖中心的主要PGD/PGS技术[6],单核苷酸多态(SNP)基因芯片可以快速简单地同时进行多种单基因疾病PGD,并同时可行23对染色体非整倍体筛查[7]。近年来,高通量测序技术可能成为最有潜力PGD/PGS技术。

2 PGS不同指征提出

PGD/PGS指征始终与分子遗传技术发展相适应。虽然PGD/PGS发展时间较短,但在PGD/PGS领域各种新的分子生物学技术临床转化速度非常快,目前PGD/PGS已成为ART技术的重要组成部分,极大地改变了ART面貌,使ART技术从单纯解决不孕不育问题转为成为优化妊娠结局的有利技术,并有可能对所有ART人群应用。1990年,PGD国际

工作组(InternationalWorkingGrouponpreimplantationgenetics)成立,其工作是对全球PGD的工作进行总结和指导。1997年,欧洲人类生殖与胚胎学会(ESHRE)PGD工作组成立,提出对高危人群进行PGS以提高成功率,并且每年进行数据统计以跟进PGD最新进展。2002年PGD国际学组(PGDIS)成立,并于2004年发表了PGD技术指南[8],该指南首次结合ART中心建立指南及PCR/FISH实验指南对PGD的各个环节给出指导意见,为建立高效有序的PGD中心提供了国际性指导方案,但是对PGD/PGS指征未给出明确的指导意见。2005年,ESHRE的PGD工作组在PGDIS指南的基础上进一步给出了PGD/PGS纳入指征指南,更具有实用性[9]。指征分为建议纳入及不建议纳入两类。PGD建议纳入诊断明确的、严重致畸或致残性且遗传可能性大(染色体重排可能性>10%;单基因遗传比例25%~50%)的单基因疾病;易位型染色体问题;HLA配型且已有干细胞治疗手段的疾病列入遗传相关指征。PGS建议纳入RSA>2次,每个中心可依地区、国家规定自行决定次数;RIF>3次移植高级别胚胎失败;或者多次移植累计达10个胚胎失败;AMA>36周岁。但是任何可能因卵巢刺激、卵泡穿刺、妊娠而产生并发症风险高的女性都建议不进行ART,生育力低下如AMA女性(40~45岁以上年龄)、基础FSH值>15IU/L、体质量指数>30kg/m2及其他不适合进行ART的疾病均不建议纳入,具体来说,窦卵泡数(AFC)数目<7个,胚胎质量差不考虑。这一版本指南没有将男性因素不育作为PGS指征,是否将男性因素不育列为PGS指征争议较大。2006年,国际上还是倾向将严重男性因素不育作为PGS指征[10],并在多中心实践,主要原因为严重男性因素可导致胚胎染色体异常几率升高[11]:胚胎原发性染色体异常如三体、单体几率及性染色体异常几率增加;梗阻性与非梗阻性无精子症患者胚胎PGS结果显示非整倍体率均高于50%[12];严重少弱精子症患者的精子与对照相比非整倍体率显著升高[13];卵泡质内单精子注射(intracytoplasmicsperminjection,ICSI)/睾丸精子获取(testicularspermextraction,TESE)-PGS后妊娠结局明显改善[14];补救ICSI后胚胎染色体异常高发,进行活检及PGS可有效地改善妊娠结局[15-16];男性年龄是否与胚胎非整倍体发生相关尚无定论,但一项基于胚胎的研究表明高龄男性(>50岁,独立于女性年龄因素)囊胚形成率降低,胚胎非整倍体发生率显著增高[17]。男性因素对胚胎的影响仍需进一步研究,是否需要将补救ICSI及高龄男性纳入PGS尚无定论。

3 PGS指征争议

RSA、RIF、AMA、严重男性因素四指征也是目前进行PGS的主要医学指征。PGS一开始的设想为降低因染色体异常带来的植入失败、流产、引产及出生缺陷风险,高龄是女性妊娠结局较差的因素之一,也是最先提出的PGS指征,但一部分ART中心实践后显示,PGS可能减少了部分染色体异常的风险,但并未改善妊娠结局,而且降低了活产率。有2篇重要的针对AMA女性PGS效果的前瞻性队列研究均显示[18-19],与对照组相比,PGS组可移植胚胎数目明显降低,持续妊娠率明显降低,活产率明显降低。这2篇文章一经发表便引起巨大争议,也动摇了国际社会对PGS的信心,直接导致2007年后PGS周期数的直转急下[20]。与此同时,针对RSA、RIF、男性因素指征进行的随机病例对照或者回顾性分析均不支持PGS有提高妊娠率的效果[21-23]。

虽然PGS负面评价不断,但大多数学者仍然认为PGS对妊娠结局有正面影响,主要集中在以下几个方面:①虽然活产率无明显提高,但流产率、多胎率有明显下降;②AMA女性PGS极大地降低了唐氏综合征发生风险,>40岁高龄女性PGS更为经济[24];③PGS可减少高龄女性因反复流产造成的情感创伤,并降低中孕期流产风险;④部分人群还是可见明显的妊娠结局改善。

由于2007年前大多数ART-PGS使用卵裂球细胞活检+有限染色体FISH技术(PGS#1),大多数学者认为可能该技术的局限导致了PGS临床效果的差异。卵裂球活检有较高的局限性:①可能对胚胎发育潜能影响较大;②可能因活检或者固定过程导致细胞核碎裂、溶解致结果不准确;③早期胚胎嵌合体多发,卵裂球结果可能错误率较高。极体活检FISH-PGS后持续妊娠率提高,也从另一方面提示可能卵裂球活检对胚胎发育潜能的影响。而FISH技术局限性也很多:①FISH信号的解读困难;②FISH探针不能覆盖全部染色体;③不同指征人群可能产生非整倍体机制不同,导致FISH-PGS结果差异[25]。对Mastenbroek等[26]发表在新英格兰杂志上的结果进行深入分析后,部分学者认为该团队经验不足,可能活检技术、细胞固定技术、FISH技术、FISH报告错误、患者选择偏倚造成最终结论不准确。基于卵裂球活检及FISH技术的局限性,国际社会开始提倡改变活检方式,同时进行CCS,终止FISH-PGS[27-28]。

4 PGS2.0的提出

PGS#2(2.0)与FISH-PGS(PGS#1)区别:①第5/第6日(D5/D6)囊胚滋养外胚层活检或极体活检,不再采用第3日(D3)卵裂球活检;②采用基因芯片或者其他技术进行CCS,弃用FISH技术[29-30]。2010年ESHRE的PGD工作组呼吁评估PGS2.0临床效果[31],得到许多支持,随后CCS有利于ART妊娠结局的报道呈爆发式增长:卵裂球活检+比较基因组杂交基因芯片(aCGH)显著提高妊娠率,降低多胎妊娠及流产率[32];aCGH准确性较FISH提高,且植入率、妊娠率提高[33];time-lapsemonitoring结合aCGH-PGS较单纯PGS显著提高妊娠率[34-35];CCS结合囊胚移植显著提高了妊娠率、持续妊娠率、活产率,降低了流产率[36],且多胎风险降低;AMA(40~43岁女性)、RSA人群临床效果也令人满意[37-38]。美国2011—2012年PGS大数据分析显示>37岁女性PGS后每周期活产率及每移植周期活产率较对照组显著提高[39];一些小型前瞻性研究显示[40],CCS显著提高预后较差女性的植入率与妊娠率。

PGS2.0主要指征同2005年ESHRE的PGD工作组发布指征,但增加了男性因素:精子常规检查异常;精子基因组衰

减(spermgenomedecay,SGD),包括染色体碎片化增加,染色质分散,非整倍体率增加等。这些男性可通过ICSI生育,但胚胎发生异常几率可能增高,应加入PGS指征。具体为:①精液指标异常需要ICSI助孕进行PGS[严重精子减少(<5×106/mL);梗阻性或非梗阻性无精];②经皮TESE-ICSI。次要指征有:前次偶发染色体非整倍体流产;胚胎质量较差;选择性单胚胎移植。

2015年,一些IVF中心报道不加选择对所有IVF患者进行PGS显著提高了妊娠率[41],开始了是否对所有IVF患者进行PGS的争论。鉴于高通量测序技术的快速发展及利用胚胎培养液游离DNA的无创PGS的提出[42],未来有可能实现对所有胚胎进行损伤小但快速准确的染色体筛查。

5 PGS2.0的局限性

虽然目前PGS2.0是选择胚胎、改善妊娠结局的一种较好的方法,其局限性也显而易见:①活检可能带来胚胎损伤、植入潜能下降、表观遗传变化及成年后可能的远期影响,亟需开发损伤更小甚至无创的检测方法以降低可能的影响;②目前PGS结果分析所需的时间超过24h,需要胚胎冷冻以选择合适时机移植,虽然现有研究显示新鲜胚胎和冷冻胚胎具有相似的妊娠结局[43],然而胚胎冷冻对胚胎发育的安全隐患一直是辅助生殖领域研究的焦点和热点,随着技术不断发展,缩短PGS出报告的时间,PGS2.0后新鲜囊胚的移植可能成为未来努力的方向;③现有PGS2.0检测技术都是基于全基因组扩增后的胚胎细胞DNA进行的分析,其分析的准确性有赖于扩增产物完整性,然而扩增偏倚无法消除,可能带来假阳性与假阴性,故目前定义的PGS仅是对非整倍体进行筛查,随着技术进步,是否可以扩大PGS的筛查范围,增加小片段重复缺失的筛查?④PGS2.0仍然无法预知嵌合体胚胎的结局,且PGS2.0对嵌合体的识别度可能较高,由于嵌合体胚胎可能发育成正常个体,也可能流产,嵌合体在所有早期异常核型流产中占比约2.88%[44],故难以界定嵌合体胚胎的妊娠结局,对嵌合体胚胎的移植前咨询成为目前难点,需要进一步研究。

6 PGS2.0展望

PGS目前争论焦点已从PGS是否对临床有利转而讨论扩大PGS指征的必要性。虽然目前仍缺乏多中心前瞻性随机对照研究证据的支持[45],仍需要重新认识和评估PGS,不可否认的是2010年后国际上大多数ART中心已将囊胚活检+PGS(PGS2.0)+FET作为常规手段运用于主要指征人群(AMA、RIF、RSA、男性因素),主要目的在于降低该人群流产风险,提高成功率,且显示较好的效果,国际社会对PGS的认同已全面恢复。PGS2.0已极大地改变了ART面

貌,可能成为未来生殖中心对所有患者的一个常规项目。

胚胎移植手术大概需要多少钱

选择不同试管，费用也会有所不同。一代试管大约为两万五至三万，二代比一代贵两万左右，第三代则大约为八到十万左右。需要注意的是，因每个人的体质、卵巢功能、对药物敏感程度的不同，会导致用药类型和时长的不同，从而产生不同费用。如果有囊肿、盆腔黏连等情况需要预处理的费用另算。

移植后需留意：

1、移植后，最好尽量躺下休息。因为植入需要三五天左右。但是如果一直卧床不起，这是禁忌。当然，卧床休息时，尽量侧卧或平躺。但也可以适当靠在床上，但角度不能超过45度。

2、48小时内尽量不要洗澡。

3、尽量避免做一些激烈的运动，比如骑自行车。慢跑是可以的，可以适当走动，但不要太累。

4、一定要保持平静的心态，不要让自己的情绪波动太大。因为很多时候情绪对胚胎植入的影响很大，尤其是人在紧张的情绪下会导致肾上腺分泌。这种激素可以杀死胚胎，所以移植后一定要多注意自己的情绪。

食物方面：

1、食谱上有些凉性食物是不能吃的，比如螃蟹，马齿鱼等等，这种食物吃多了会导致流产。

2、有些活血的食物当然也不能吃，如山楂，甲鱼，红花等等。另外，韭菜，杏仁，桂圆，香料，荔枝等相关食物也尽量不要吃。

尽量在饭后食用牛奶，豆浆，因为在饭前食用时，可能会引起拉肚子，在饮用时尽量饮用温，这样可以减少对肠胃的刺激。

什么是胚胎移植

胚胎移植属于是将良种雌性动物配种后的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育成为新个体，所以也称作借腹怀胎。其中，提供胚胎的个体为“供体”（donor），接受胚胎的个体为“受体”(recipient)。胚胎移植实际上是产生胚胎的供体和孕育胚胎的受体分工合作共同繁育后代的过程胚胎移植被认为是继家畜人工授精技术之后家畜繁殖领域的第二次革命。人工授精技术极大地提高了优秀种公畜的利用率，胚胎移植技术则极大地增加了优秀母畜的后代数，挖掘了母畜的遗传和繁殖潜力。在畜牧业生产与科研中，胚胎移植技术主要用于以下几个方面：

（1）增加进口纯种畜和优秀个体的后代数。用于纯繁扩群，增加种畜的数量。

（2）缩短家畜的改良周期，加速品种改良。纯种牛的胚胎移植给黄牛，可将15－20年的改良周期变为一年，大幅度地提高了家畜的遗传品质和生产性能。

（3）用于单胎动物的育种，可缩短选择种牛的年限。如牛的MOET育种方案比后裔测定育种方法遗传进展快。

（4）移植产双胎，提高生产效率。对肉用家畜尤其有价值。同时移植双胚或双半胚或在配种后第7天前后移植一枚胚胎，可获得30%以上的双犊率。

（5）代替种畜的引进。

（6）保存品种资源。保存于具有优良遗传特性的家畜胚胎库、基因库，保护濒临灭绝的家畜和动物品种。

（7）用于一些疾病的诊断和治疗。

（8）发展家畜生物技术的研究手段。这项技术是胚胎分割、嵌合、核移植、体外受精和转基因动物等家畜生物技术不可缺少的技术革新手段，也可用于生物学和医学的研究。

特别值得一提的是，通过胚胎移植产下的后代可从本地母牛获得免疫，疾病抵抗力增强，胚胎传染疾病的危险性减小。胚胎移植技术被越来越多地用于牛的引种和牛群的品种改良。

生理学基础编辑

胚胎移植能否成功，与供体和受体的生理状况有关。

1、哺乳动物发情排卵后，不管是否妊娠，在一段时间内，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的，这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。

2、哺乳动物早期胚胎形成后，在一定的时间内不会与母体子宫建立组织上的联系，而是处于游离状态，这就为胚胎的收集提供了可能。

3、大量的研究已经证明，受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

4、供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受任何影响。

基本程序编辑

以家畜为例，胚胎移植主要包括对供、受体的选择和处理，配种或进行人工授精（人工受精前，精子需进获能处理），对胚胎的收集、检查、培养或保存，对胚胎进行移植，以及移植后的检查等步骤。

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