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1材料和方法
1.1材料ICR和C57BL/6小鼠.所有实验用小鼠均在SPF动物房饲养,温度控制在℃,光控,自由采食.Co60灭菌饲料;孕马血清,46~48h后给供体鼠注射hCG,hCG注射当日下午和雄鼠合笼,次日6:30~8:00检查雌鼠有无阴栓以判定是否已经交配.
1.2.1.2受体鼠的预备实验开始前提前预备输精管结扎雄鼠,挑选至少两次和雌鼠交配后都不能使其受孕的结扎雄鼠备用.实验第3日下午合笼受体鼠和结扎雄鼠,次日06:30~08:00检查雌鼠有无阴栓以判定是否已经交配,交配成功的雌鼠作为胚胎移植的受体鼠.
1.2.1.3受精卵的收集处死供体鼠,打开腹腔,取出输卵管.将输卵管置于M2培养液中,用小镊子撕开输卵管膨大部,可见有卵团溢出,用吸管〔5-6〕将卵团转移至含有透明质酸酶的M2培养液滴中,吹吸数次,洗掉卵细胞四周的泡沫细胞.将受精卵转移至含有M16培养液滴的培养皿中,37℃,50mL/LCO2培养箱内短暂培养.
1.2.2胚胎移植方法将106只受体雌鼠随机分为两组,其中一组采用传统的胚胎移植方法〔4〕;另一组采用改进的胚胎移植方法.
1.2.2.1传统的胚胎移植方法〔4〕用水合氯醛麻醉受体鼠,沿受体鼠背部中线最后一根肋骨水平切1cm左右切口,轻轻拨开切口,可见位于卵巢上方的白色脂肪垫.用小镊子夹住白色脂肪垫将其拉到体外,用小血管夹夹住,并靠其重力起固定作用,以防输卵管缩回体腔.用移卵管吸15~20个受精卵预备移植.将小鼠转到解剖镜下仔细寻找到输卵管.可见输卵管被一层呈半透明的囊膜所包绕,将囊膜撕破而暴露输卵管,将移卵管内受精卵移植到输卵管膨大部.
1.2.2.2改进的胚胎移植方法麻醉及手术区域暴露同上,但在胚胎移植囊膜处理时不同.先用吸卵管在囊膜无或少血管分布处穿一小洞,再将吸卵管通过囊膜上的小洞轻轻送进输卵管口,将移卵管内受精卵移植到输卵管膨大部.
2结果
2.1胚胎移植术改进前后ICR小鼠胚胎移植成功率比较ICR小鼠在改进胚胎移植术式后比传统的胚胎移植技术在成功率上有较大的提高,统计学比较有显著差异7380-7384.
卵子取出后,与精子在试管内共同孵育,每个卵子约需10万条精子。受精后,受精卵分裂形成早早期胚胎,即 2~8个分裂球时即可进行胚胎移植(ET),此时约在采卵后48小时,此时间也可根据具体情况稍加以变动。
如推后一天,这时也可能更利于优选胚胎。如果过早,宫腔内环境反而可能不利于接受胚胎。
供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受任何影响。
经胚胎移植产生的后代从受体得到营养发育成新个体,但其遗传物质则来自它的真正亲代,即供体动物和与之交配的公畜。胚胎移植入子宫时,妊娠成功率最高为囊胚时期。
扩展资料:
进行胚胎分割时,应选择发育良好的桑葚胚或囊胚,用分割针或分割刀进行分割,对囊胚进行分割时,要注意将内细胞团均等分割,否则会影响胚胎的恢复和进一步发育。
胚胎分割主要用于优良品种的繁殖,以牛为例,有的牛奶多,但繁殖慢。这时,就用促性腺激素促使该良种母牛超数排卵。
然后把卵从该母牛体内取出,在试管内与人工采集的精子进行体外受精,培育成胚胎,再把胚胎送入经过同期激素处理、可以接受胚胎、孕期相同的母牛子宫内,孕育出小牛。
利用优良品种的雌畜,在人工注射雌性激素条件下,使卵巢一次排出更多数量的卵。例如,母牛通常一次只能排出一个卵,但通过人工注射雌性激素后,一次能排出6~8个卵,然后再用优良公牛的精子进行人工授精。当然,这些受精卵在一头母牛内发育是不可能的,必须用人工方法把这些受精卵或早期胚胎(不超过7天)从亲母牛(遗传母牛)取出,移植到正处在发情期的养母牛(代理母牛)子宫内,以发育成新个体。这种借代母牛的腹以怀遗传母牛的胚胎的方法叫胚胎移植。一头代理母牛(不一定是优良品种),一次可移植两个受精卵或两个早期胚胎。
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