冷冻胚胎孵化 冷冻胚胎和鲜胚哪个好

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鲜胚和冻胚有什么区别

冻胚和鲜胚的区别

1、鲜胚就是在培养皿当中培养出来的胚胎，还处于鲜活的的阶段。没有经过任何的处理的。

冻胚则是将培养出来的胚胎进行了液氮冷冻保存，也就是将胚胎的新陈代谢暂停了。等到需要移植的时候就解冻移植;

2、冻胚解冻之后，其实跟鲜胚一样鲜活，没有任何的不同。至少从目前的科学研究和实践生出来的孩子来看，并没有任何的区别。

为什么要冻胚胎

这出于两方面的考虑：

一方面可用于一个超排卵周期得到的胚胎数量多，质量好，不能一次全部移植，所以剩下的的冷冻胚胎保存。

另一方面很多患者发生严重卵巢过度刺激综合证，不宜在治疗周期移植胚胎者，可将冷冻胚胎。待身体调理好了之后再选择移植。

冻胚和鲜胚哪个成功率比较高

1、从胚胎角度来看。冷冻胚胎与新鲜胚胎并无区别。胚胎冷冻后，只要解冻后仍能存活并继续发育，是没有任何问题的。而冻胚只会在解冻过程中受损，而因解冻而受损的胚胎是不能再进行移植的，因此冻胚移植的胎儿不会受到任何影响。

2、从患者角度来看。部分女性朋友会在促排卵后一小段时间里内暂时性的内分泌絮乱，这样不但会使女性的子宫并没有与胚胎的发育同步，这样会对试管婴儿成功率产生影响。而冻胚移植则可以在药物反应消失后，甚至可以慢慢等女性的身体调理好再做胚胎移植，而这种情况下，冻胚移植成功率反而要比较高了。

试管冻胚和鲜胚哪个好

冻胚比较好。

鲜胚还是冻胚移植，其实这种两种方法没有好坏之分。选择哪一种方法，要在取出卵子后，再次检查女性子宫才能确认是鲜胚还是冻胚移植。事实上，胚胎在新鲜周期植入，并不一定会增加成功着床的机率。

顺利怀孕除了胚胎本身的品质，子宫内膜的接受度也是很重要的。在新鲜植入周期中，因为在取卵前都有使用大量诱导排卵的药物，所以身体的贺尔蒙浓度都会远高于一般生理状态，而这些贺尔蒙浓度过高时可能会造成子宫内膜提早成熟，子宫内膜基因表现改变等现象，可能影响胚胎着床。

扩展资料：

对不孕症病人进行“试管婴儿”的疗程中，一般会借助促排卵药物的刺激来增加成熟卵子数，往往可使卵巢一次生长十个以上的卵子。但实际上在每一次的“试管婴儿”疗程中，只有1-3个胚胎移植回子宫腔。植入过多的胚胎可能增加多胞胎的危险性，因此剩余的胚胎可进行冷冻保存。

如果在治疗的周期没有成功，保存的胚胎可以在以后的自然排卵周期或激素替代周期移植回母体，不必再进行超排卵，不但可免除打针的痛苦，也可节省不少费用。

参考资料来源：百度百科-冷冻胚胎

胚胎分割技术的发展史

胚胎工程

在胚胎发育过程中进行的生物技术，称为胚胎工程技术

包括：胚胎移植、胚胎融合、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎性别鉴定、胚胎细胞核移植、转基因操作等

Aristotle胚胎完全来自雌性，雄性精液的贡献是非物质性

17世纪，英 William Harvey动物完全来自卵子

1673，Malpighi“先成说”来自未受精卵子

6年后，Leeuwenhoek精子发现，“精源说”

1759年，德国Wolff“后成说”

鱼、两栖类、爬行类、鸟类的卵子很大，因此错误的认为哺乳类的卵子也很大，把卵泡错误的认为是卵子，1827年被纠正

19世纪初，首次观察到精子穿入卵子，开始对两性在生命个体发生中的作用有所了解，而精子、卵子体积都非常小，肉眼很难分辨，并且受精是在体内发生，因此研究受到了研制研究简介

1878，德Scnenk尝试哺乳动物卵子体外受精

1890年，Heape，兔

1944年，Rock、Menkin，人

1945年，张明觉，兔体外受精，后5年内没有重复出来

1951年，Chang和 Austin发现精子获能现象，体外受精史上的里程碑

1959年，首例试管兔出生，体外受精技术真正得到承认

1964年，Yanagimachi获得试管仓鼠

1978年，首例试管婴儿出生，体外受精技术走向全面应用的标志性事件，是医学和生物学上的一次伟大革命

l濒危动物的保护

1983年，黑猩猩体外受精，观察到卵裂

1989年，大熊猫精子成功体外获能

1990年，美洲虎和美洲豹，同年获得美洲虎体外受精后代基本技术

体外培养

体外受精与发育

精子、卵子、胚胎冷冻保存体外受精（in vitro fertilization,IVF)

定义在体外环境完成精卵结合的过程

步骤Ø卵母细胞的体外成熟Ø精子的体外获能Ø卵母细胞的体外受精Ø受精卵的体外发育Ø配子和胚胎的冷冻保存卵母细胞的体外成熟

体外成熟-卵母细胞的回收回收方法•抽吸法（常用）•切割法（回收到卵子数目比较多）回收卵子分级• A级,有3层以上致密的卵丘细胞,胞质均匀凝暗• B级,卵丘细胞在3层以下或部分脱落、但胞质均匀• C级,卵丘细胞层很少、松散或全部脱落、胞质无凝块或无颗粒状。• D级，死亡或退化的卵母细胞。• A级和B级卵母细胞可用于体外成熟培养体外成熟-影响因素 l卵母细胞成熟涉及细胞核、细胞质和质膜的成熟变化 l细胞质成熟机制尚不清楚,但肯定涉及细胞质成分的重组和卵质蛋白的合成，为受精和胚胎发育做准备体外成熟-影响因素 l发情周期的阶段和卵泡大小 l卵母细胞成熟培养体系 l激素、血清和生长因子（细胞质的成熟）精子的体外获能 l哺乳动物精子在附睾里成熟,在射出后不是立即就具有与卵母细胞受精的能力,这些精子必须经过一个获能期,这个获能期在自然情况下发生在雌性生殖道里 Austion(1951) l精子在雌性生殖道停留一段时间,发生一系列生理生化变化,才能成功地与卵子结合称为受精,精子能够受精的能力为“获能”( capaciation)顶体反应 l由精卵结合诱发的胞吐作用,是精卵融合的先决条件。它使精子能够进入卵周隙,暴露和修饰精子表面的顶体内膜区域 l精子首先通过顶体反应后暴露出的顶体内膜与卵细胞膜接触,随后,精子的赤道段和头后部区域与卵细胞膜结合和融合 l在人类,顶体反应对于精子附着于卵细胞膜非常重要而且是必须的 l只有发生了顶体反应的精子才能与卵细胞膜融合精子的获能处理 l

体内获能——交配母畜的子宫内冲取

精子 l体外获能

精子体外获能方法 l血清白蛋白溶液共孵育 l高离子强度溶液处理(HIS) l钙离子载体 l氨基多糖 l添加黄嘌呤类诱导物（咖啡因、茶碱等） l血小板激活因子卵母细胞的体外受精

1.常规体外受精技术——获能精子与卵子共培养

2.与分离精子相结合的体外受精技术

3.显微受精技术——透明带下注射卵细胞质内单精子显微注射

受精卵的体外发育-1受精卵的体外发育-2受精卵的体外发育-3受精卵的体外发育-阻滞 l牛胚胎在发育到8～16细胞时存在“阻滞” l小鼠2细胞、大鼠2细胞、猪4细胞、绵羊8～16细胞 l有趣的是胚胎在体外发育出现阻滞的时期,对应于体内是在生殖道里体外发育阻滞阶段的存在表明 l 8～16细胞的发育阶段需要有输卵管提供的特殊的环境条件 l含有早期胚胎发育的因素或条件的是输卵管而不是培养液如何克服受精卵的体外发育阻滞 l回到体内培养环境(移植到受体输卵管) l饲养层共培养，刺激胚胎的发育用于饲养层的细胞有–来源于繁殖器官的细胞–来源于非繁殖组织的细胞–滋养层细胞配子和胚胎的冷冻保存 l原理–利用冷冻保护剂将胚胎保存在超低温环境中(通常是- 196℃的液氮中)–低温能够抑制胚胎细胞的生化活动,降低新陈代谢而保存胚胎，当需要时再将胚胎解冻,复温到正常温度后进行移植低温损伤的两因素理论 l

1972年Mazur¡ª¡ª细胞或胚胎低温损伤的两因素理论，即溶液效应而造成的化学损伤和细胞内结冰而造成的物理损伤。由于冷却速度过慢，胞外溶液中水分大量结冰，溶液浓度提高，胞内水分大量渗出，导致细胞的强烈收缩和细胞处于高浓度的溶液中时间过长，从而造成化学损伤。 l由于冷却速度过快，胞内水分来不及通过细胞膜向外渗出，胞内溶液过冷而结冰，从而造成物理损伤。同样，在复温（解冷）过程中，如果复温速率不当也可能引起细胞内结冰（重结冰）而损伤 l此外，抗冻保护剂的加入或去除不当，则会引起细胞渗透压的明显变化；细胞内外电解质浓度的改变等而造成细胞或胚胎损伤冷冻保存的关键

减少细胞内冰晶对胚胎造成的损伤

保存措施 l

保存液中加入一定浓度的保护剂。

（1）细胞内液保护剂：低分子量可渗物质，如甘油、DMSO、乙二醇等

（2）细胞外液保护剂：低分子量不可渗物质，如半乳糖，蔗糖等通常用pH7.2-7.4的PBS配制。

冷冻保护剂作用 l

能使细胞充分脱水 l

解冻时则以较快的速率升温，使胚胎瞬间通过危险温区（-50～0℃），然后脱除对胚胎细胞有一定伤害作用的冷冻保护剂，使胚胎存活。

低温冻贮的影响•

降低新陈代谢•影响细胞主动离子转运和细胞容积调节•冷休克冷冻方法慢速冷冻（程序冷冻）快速冷冻（玻璃化法）超快速冷冻法胚胎冷冻方法(embryo cryopreservation) l常规冷冻 l一步冷冻法 l玻璃化冷冻法常规冷冻 n将胚胎依次放入含0.7mol/L甘油+PBS和含1.4mol/L甘油+PBS液中，各平衡7~10min; n将平衡后的胚胎装入0.25ml细管放入预先冷却至-7℃的冷冻液，中间段为含胚胎的冷冻液，每段之间用气泡隔开； n将细胞放入预先冷却至-7℃的冷冻仪中，平衡10min后，用液氮中预冷过的医用镊子植冰； n以0.3℃/min的速度，降温至-35℃; n将细管投入液氮； n解冻时从液氮中取出细管，在空气中平衡10-20s，投入35℃水浴中，至冰晶融解后取出； n推出冷冻液及胚胎，将检出的胚胎移入含1.0mol/L蔗糖的PBS中10min，一步脱除冷冻保护剂，再用PBS洗涤胚胎2-3次，用于移植。一步冷冻法也叫一步细管法。该方法是由常规冷冻法改进而来，细管内的冷冻液和蔗糖液是分开的因此，在细管内用蔗糖液可一步脱除甘油抗冻剂，从而利于在生产中推广应用所有溶液在低温时变粘稠，不发生结晶即可固化，形成一种特殊的¡°玻璃化¡±状态，从而使胚胎在急剧的降温过程中得以存活。胚胎冷冻保存技术的应用应用范围广泛，且在某些领域也是必需的（如人体移植器官的保存），在实验动物领域的应用，主要有以下4个方面: 1.应用于实验动物的保护和珍稀、濒危动物种质保存实验动物品种品系的维持，需要一定的场所、设备和大量的物力、财力、人力的投入，并且又不可能完全避免在长期保种繁殖过程中发生基因丢失或漂移。采用胚胎冷冻保存技术，既能把数以千计的实验动物品系保存下来，又能保持它们的遗传品质不便，还可以大大降低保种成本。⒉应用于实验动物的长途运输动物的运输受气候、运输条件等一系列因素的影响。采用胚胎冷冻技术，可以在世界范围内将运输实验动物改为运输实验动物胚胎，从而快速、廉价、便利地实现实验动物资源共享。⒊应用于实验动物的生物净化被病原体感染的实验动物的生物净化，传统上一般采用子宫切开术，取出胎仔由无菌动物或SPF动物代乳。但是这种方法成功率并不高，而且较为麻烦。对于为数甚少的珍贵实验动物（如转基因动物、自然突变动物）按传统方法实行生物净化技术很难达到目的，因为不可能有成批怀孕母鼠用于剖宫取胎。通过胚胎冷冻、胚胎移植等技术，可以使生物净化变得更简便和安全⒋应用于实验动物育种和野生动物的实验动物化胚胎克隆技术、体细胞克隆技术结合胚胎冷冻技术，已经应用于实验动物和其他动物的育种。优点很明显，可以缩短育种时间，可以克服野生动物进入实验室后因环境改变而交配困难，可以利用极少量的原种繁殖出大量的后代，可以克服杂交障碍而实现基因的种间转移（如转基因动物等）胚胎的辅助孵化

Assisted hatching l胚胎冻融可使部分卵裂球衰亡,透明带硬化、破裂而影响胚胎的孵化和着床 l应用显微操作技术,在胚胎移植前,将透明带打孔或使其变薄,使胚胎发育至囊胚阶段,容易脱出透明带与子宫内膜融合辅助孵化方法 l酶消化法 l激光打孔法 l机械切除法 l酸化法 l辅助孵化并不是对所有的患者和所有的胚胎都有提高植入率的作用 l仅是对于那些因某种原因导致自身孵化困难的胚胎有帮助–透明带过厚的胚胎–透明带异常的胚胎胚胎分割 l指用人工方法将植入前胚胎（2细胞～囊胚期）分割成两个或多个部分，分割后的每个部分在适宜的条件下可分别发育 l如移植给适当母体，可得到两个或多个基因型和表型一致的后代 l这一技术已在绵羊、牛、小鼠、大鼠、马、猪等哺乳动物中广为应用胚胎分割的基本原理通过对胚胎的显微外科操作，把一个胚胎分割成两个或多个，由于胚胎发育早期，每个卵裂球都具有发育成一个完整个体的潜在可能性，因此通过胚胎分割技术，可以人工制造同卵双胎或多胎，可成倍地增加胚胎数和产犊数胚胎分割应用 l动物超数排卵与胚胎移植 l克隆动物 l干细胞 l试管婴儿 l转基因动物与动物反应器胚胎移植（embryo transfer)胚胎移植的目的供体超排与配种受体同期发情处理胚胎的采集胚胎的检查移植胚胎胚胎移植 l胚胎移植（embryo transfer)也称受精卵移植，是指一头母畜（称为¡°供体¡±）发情排卵并经过配种后，在一定时间内从其生殖道（输卵管或子宫角）取出受精卵或胚胎，然后把它们移植到另外一头与供体同时发情排卵、但未经配种的母畜（称为¡°受体¡±）的输卵管或子宫角。这个来自供体的胚胎能够在受体的子宫着床，并继续生长和发育，最后产下供体的后代。 l¡°借劣质动物之腹怀优秀个体之胎¡±胚胎移植

成功的羊胚胎移植的目的 n发挥优良母畜的繁殖潜力 n促进家畜改良的速度 n作为胚胎操作的基础 n长期保存冷冻胚胎，便于运输和保存遗传资源胚胎移植过程体外受精（IVF）与胚胎移植（ET）胚胎融合 l胚胎融合的意义 l胚胎融合方法 l嵌合体的鉴定胚胎融合又称嵌合体制作，就是将两个不同品种或不同种除去透明带胚(裸胚)粘合在一起，或者各自一分为二，然后各取一半，融合成新的胚胎，移植给受体，产生具有杂交优势的新后代——嵌合体胚胎融合的意义 l为动物胚胎发育及遗传控制等研究提供了有效手段 l嵌合体后代可集不同品种或不同种动物的不同基因于一体，完全有可能把母代动物的优良遗传性能集中表现出来，从而形成具有高度杂种优势的杂合体。 l嵌合体母畜与公畜交配后，能产生具有正常繁殖力的后代。所以胚胎融合不仅可成倍缩短家畜改良时间，而且也为创造新型的家畜品种提供新的技术手段胚胎融合方法 1．石蜡油挤压法 2．内细胞团囊胚注入法

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