冷冻胚胎解冻液，冷冻胚胎是什么原理

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试管婴儿胚胎解冻流程是怎么样的呢

冷冻胚胎解冻过程如下：

1、确认身份找出相应麦管，从液氮罐中取出麦管，拿出麦管在室温下解冻30秒。用纸擦去麦管外面的冰，室温解冻时必须仔细检查麦管内是否有气泡、裂缝或者液氮渗漏。

2、将麦管放进30℃水中浴30秒，拿出小心擦干，消毒剪去一端，接上1ml注射器。然后剪去另一端，不可晃动以免造成气泡。

3、小心地将胚胎吹入专用的解冻液器皿中。观察胚胎是否从麦管中被吹了出来，假如没被完全吹出来，应当吸取一点液体再试，因为胚胎也许会黏附在麦管壁上。然后在器皿中孵育5分钟，再将胚胎移入下一个器具中保持5分钟，然后再移入再下一个器具中5-10分钟。

4、将胚胎放进室温解冻液器皿，接着放入37℃器皿中保持10分钟。然后需要检测胚胎存活率并评价胚胎形态。这时的胚胎能够立即进行移植，也能够在培养一段时间后移植。

注意：实验室冷冻胚胎解冻操纵过程对胚胎冷冻成功与否也极为关键。确保在适宜的时间将胚胎移植进入受体子宫内，除此之外，冷冻胚胎既能够在自然周期进行移植，也能够在人工周期移植。

一般状况下，解冻后存活的胚胎在体外培养复苏2-4小时后即可进行移植手术。所以整个解冻过程比较短，但是实际上实验室操作需要遵循十分严格的操作步骤来才行，要不然尽管如今的冷冻胚胎解冻成功虽然十分高，但如果实验室操作有误，也会造成胚胎解冻失败，所以这就要求医院操作人员经验丰富了。

因为在进行试管婴儿的时候将剩余的胚胎冷冻保存，可降低治疗费用、缩减治疗周期时间，提升了治疗成功率，降低试管并发症的发生，所以临床上采用冷冻胚胎的不孕不育家庭十分多，同时对于试管婴儿来说，冻胚移植那就离不开解冻胚胎、复苏胚胎。

试管婴儿胚胎冷冻标准

试管婴儿胚胎冷冻标准

试管婴儿胚胎冷冻标准，现在很多女性由于身体原因不能生育，但是没关系，现在科技很发达，试管婴儿就是为这类人群提供便利的，对于试管婴儿相关知识你了解吗？下面我们就来看看试管婴儿胚胎冷冻标准。

玻璃化冷冻法，是高浓度冷冻保护剂溶液在快速冻结过程中由液态直接变为极其粘稠的、非结构的玻璃态，而无冰晶形成。从冷冻保存的时限来看，理论上是可以无限期保存的。

理论上讲，由于胚胎在零下196摄氏度的环境下，代谢完全停止，所以能够永远保存。但是，自从胚胎冷冻技术的出现到现在为止，仅仅只有大约20年的时间。据报道，在以色列，一名39岁的妇女移植了她冷冻保存12年的胚胎后，出生了正常的婴儿。这也是迄今报道的最长期保存的冷冻胚胎移植的试管婴儿出生的例子。也许有些胚胎已经冷冻保存了更长的时间，但却仍然没有被解冻移植，因此，它们的存活状况暂且无法得知。

冷冻胚胎的存活率也是检验一个试管婴儿实验室好坏的标准。因为胚胎冷冻喃解冻是一个复杂的过程，有许多环节，包括冷冻液的配制、冷冻保护剂的选择、浓度、冷却时的速度、解冻时的温度变化等都需要一定的`技术和经验。如果任何一个环节出了问题，胚胎就会在解冻后停止发育或在解冻过程中死亡。

由于目前的冷冻方法和程序已接近半自动化，冷冻胚胎的存活率一般在80%以上以至于90%以上。近年来改良的玻璃化冷冻能使冷冻胚胎的存活率达到95%以上。

唤醒冷冻胚胎前，应先做生育能力评估。生育二孩政策放开在即，那些有冷冻胚胎并准备再度生育的女性，往往不再年轻，专家提醒：再次生育前，应做好生育能力评估，并排查基础疾病。得有妊高症等高危妊娠风险的，最好在高危产科评估后再考虑生育。“完善了生育能力、全身重要器官和系统的评估后，一些有严重的高血压、糖尿病、心脏病、心功能不全疾病的妇女，并不主张进行二孩生育。对于她们而言，再次生育这样的尝试很冒险。”

事实上，决定女性能否继续生育的因素不是年龄，不是身体调养，而是被忽视的卵巢储备功能。若卵巢功能完好，则有机会继续怀孕，若卵巢储备消耗完全，则不管再年轻，身体条件再好，也是徒劳无功的。

所以在想生二孩的高龄女性朋友需要先做好孕前检查、了解自己还有无生育能力，进行卵巢功能评估，了解自己的卵巢储备功能，再决定是否备孕、如何备孕做好准备工作，搭上二孩政策的顺风车

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按照理论上的说法可以存放20年，一般可以稳定保存5—10年，冷冻保存时间的长短并不影响胚胎的继续发育能力。

试管婴儿胚胎可以在任何时期冷冻保存。

但目前最常用的是第3天的胚胎和第5天或第6天的囊胚，人们选择这两个时期是由于胚胎移植一般是在第3天、第5天或第6天进行。移植后剩余的胚胎就需要冷冻保存起来。

冷冻胚胎是保存生育功能的唯一成熟方法。冷冻胚胎的技术是将通过试管培育技术得到的胚胎，存置于零下196℃的液氮环境中，得到长时间保存。

如果这个周期治疗失败，可以在以后的自然周期中解冻这些胚胎并进行移植。

冻胚胎经过慢速（第2—3天的胚胎）和快速（第5—6天的囊胚）两种降温方式使胚胎能静止下来并可在196度的液氮中保存的一种方法。

若有剩余的质量较好的胚胎，可以冷冻保存，待以后自然周期或人工周期解冻后植入子宫腔内，将增加受孕的机会。

可用于一个超排卵周期得到的胚胎数量多、质量好，不能一次全部移植的人，可将多余的冷冻胚胎保存。

以及发生严重卵巢过度刺激综合证的患者，不宜在治疗周期移植胚胎者，可将胚胎冷冻，待以后的自然周期或人工周期进行胚胎复苏移植。

冷冻胚胎复苏临床妊娠率为48.28%，囊胚冷冻复苏临床妊娠率为63.48%。

冷冻胚胎并不是冻的时间越长质量就越不好，冷冻一天和冷冻十年是一样的。

因为主要是在冷冻胚胎和复苏胚胎的过程胚胎有可能不耐受冷冻出现损伤，至于胚胎冷冻在液氮里对胚胎质量的影响和时间无关。

试管婴儿冷冻技术非常先进，其中包含了胚胎冷冻、卵子冷冻和精子冷冻。现在越来越多的人开始做冷冻，是因为这方面的技术给人们带来了很多好处，例如：

降低费用

胚胎冷冻是用于在试管婴儿技术失败的患者，不宜在治疗周期移植胚胎患者，提供第二次移植的机会。可以在以后选定的适当时机内，将保存的胚胎复苏后移植回母体，再次或多次重复试管婴儿技术，不必再次进行女性的超促排卵。可以大大地降低了试管婴儿的费用。

避免多胎妊娠

植入多个胚胎会造成多胎妊娠的可能性，如果通过胚胎冷冻是可以合理限制移植胚胎数，降低多胎妊娠率。

生殖保险

如果因为病情需接受卵巢切除、放疗或化疗的病人，可在治疗前预先保存胚胎，在适当的时候，进行再次胚胎移植。

计划生育保障

拟采取计划生育措施者，或夫妻两人暂不想生育孩子，但想将年轻时质量良好的受精卵保存起来留待条件成熟移植。

胚胎如何冷冻保存

三步平衡法

（1）10%甘油保存液的配制

取9毫升20%羊血清的PBS，加入1毫升甘油，用吸管反复混合15～20次，经0.22微米滤器过滤到灭菌器内待用。

（2）取含20%羊血清0.3摩尔蔗糖的PBS 2毫升和3.5毫升，分别加入10%甘油3毫升和1.5毫升，配成含6%和3%甘油的蔗糖冷冻液。将3%、6%和10%三种甘油浓度的冷冻液分别装入小培养皿。

（3）胚胎分别在3%、6%和10%甘油的冷冻液中浸5分钟。

（4）胚胎装管

用0.25毫升塑料细管按以下顺序吸入，少量的10%甘油的PBS液、气泡、10%甘油的PBS液（含有胚胎）、气泡、少量的10%甘油的PBS液，加热封口两道（图9-18）。

图9-18胚胎装管示意图

（5）塑料细管的编号

剪一段（2厘米）0.5毫升塑料细管作为标记外套，内装色纸，注明供体品种、耳号、胚胎发育阶段及等级、制作日期（年、月、日），并在外套管上写明序号备查。

（6）冷冻程序

将细管直接浸入冷冻仪的酒精浴槽内，以1℃/分钟的速度从室温降至-6℃，停5分钟后植冰，再停留10分钟，以0.3℃/分钟的速度降至-36℃，再以0.1℃/分钟的速度降至-38℃，直接投入液氮，长期保存。

（7）冷冻胚胎的解冻

①解冻液的配制根据上文所述配制出10%、6%和3%甘油的蔗糖解冻液，用0.22微米过滤器灭菌，分装在小培养皿内，第1～4杯分别为10%、6%、3%、0%甘油的蔗糖解冻液，第5杯为PBS保存液。

②胚胎的解冻胚胎从液氮中取出，在3秒钟内投入38℃水浴，浸10秒钟。

③三步脱甘油用70%酒精棉球擦拭塑料细管和剪刀刃，剪去棉塞端，与带有空气的1毫升注射器连接。再剪去细管的另一端，在室温下将胚胎推入10%甘油和0.3摩尔蔗糖的PBS解冻液中，放置5分钟后依次移入6%、3%和0%甘油的蔗糖PBS解冻液中，各停留5分钟，最后移至PBS保存液中镜检待用。

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