胚胎如何解冻，胚胎解冻后怎么证明还活着

大家好，关于胚胎如何解冻很多朋友都还不太明白，今天佳运育儿网小编就来为大家分享关于胚胎解冻后怎么证明还活着的知识，希望对各位有所帮助！

胚胎如何冷冻保存

三步平衡法

（1）10%甘油保存液的配制

取9毫升20%羊血清的PBS，加入1毫升甘油，用吸管反复混合15～20次，经0.22微米滤器过滤到灭菌器内待用。

（2）取含20%羊血清0.3摩尔蔗糖的PBS 2毫升和3.5毫升，分别加入10%甘油3毫升和1.5毫升，配成含6%和3%甘油的蔗糖冷冻液。将3%、6%和10%三种甘油浓度的冷冻液分别装入小培养皿。

（3）胚胎分别在3%、6%和10%甘油的冷冻液中浸5分钟。

（4）胚胎装管

用0.25毫升塑料细管按以下顺序吸入，少量的10%甘油的PBS液、气泡、10%甘油的PBS液（含有胚胎）、气泡、少量的10%甘油的PBS液，加热封口两道（图9-18）。

图9-18胚胎装管示意图

（5）塑料细管的编号

剪一段（2厘米）0.5毫升塑料细管作为标记外套，内装色纸，注明供体品种、耳号、胚胎发育阶段及等级、制作日期（年、月、日），并在外套管上写明序号备查。

（6）冷冻程序

将细管直接浸入冷冻仪的酒精浴槽内，以1℃/分钟的速度从室温降至-6℃，停5分钟后植冰，再停留10分钟，以0.3℃/分钟的速度降至-36℃，再以0.1℃/分钟的速度降至-38℃，直接投入液氮，长期保存。

（7）冷冻胚胎的解冻

①解冻液的配制根据上文所述配制出10%、6%和3%甘油的蔗糖解冻液，用0.22微米过滤器灭菌，分装在小培养皿内，第1～4杯分别为10%、6%、3%、0%甘油的蔗糖解冻液，第5杯为PBS保存液。

②胚胎的解冻胚胎从液氮中取出，在3秒钟内投入38℃水浴，浸10秒钟。

③三步脱甘油用70%酒精棉球擦拭塑料细管和剪刀刃，剪去棉塞端，与带有空气的1毫升注射器连接。再剪去细管的另一端，在室温下将胚胎推入10%甘油和0.3摩尔蔗糖的PBS解冻液中，放置5分钟后依次移入6%、3%和0%甘油的蔗糖PBS解冻液中，各停留5分钟，最后移至PBS保存液中镜检待用。

胚胎是如何保存的大家知道吗

三步平衡法

（1）10%甘油保存液的配制

取9毫升20%羊血清的PBS，加入1毫升甘油，用吸管反复混合15～20次，经0.22微米滤器过滤到灭菌器内待用。

（2）取含20%羊血清0.3摩尔蔗糖的PBS 2毫升和3.5毫升，分别加入10%甘油3毫升和1.5毫升，配成含6%和3%甘油的蔗糖冷冻液。将3%、6%和10%三种甘油浓度的冷冻液分别装入小培养皿。

（3）胚胎分别在3%、6%和10%甘油的冷冻液中浸5分钟。

（4）胚胎装管

用0.25毫升塑料细管按以下顺序吸入，少量的10%甘油的PBS液、气泡、10%甘油的PBS液（含有胚胎）、气泡、少量的10%甘油的PBS液，加热封口两道（图9-18）。

图9-18胚胎装管示意图

（5）塑料细管的编号

剪一段（2厘米）0.5毫升塑料细管作为标记外套，内装色纸，注明供体品种、耳号、胚胎发育阶段及等级、制作日期（年、月、日），并在外套管上写明序号备查。

（6）冷冻程序

将细管直接浸入冷冻仪的酒精浴槽内，以1℃/分钟的速度从室温降至-6℃，停5分钟后植冰，再停留10分钟，以0.3℃/分钟的速度降至-36℃，再以0.1℃/分钟的速度降至-38℃，直接投入液氮，长期保存。

（7）冷冻胚胎的解冻

①解冻液的配制根据上文所述配制出10%、6%和3%甘油的蔗糖解冻液，用0.22微米过滤器灭菌，分装在小培养皿内，第1～4杯分别为10%、6%、3%、0%甘油的蔗糖解冻液，第5杯为PBS保存液。

②胚胎的解冻胚胎从液氮中取出，在3秒钟内投入38℃水浴，浸10秒钟。

③三步脱甘油用70%酒精棉球擦拭塑料细管和剪刀刃，剪去棉塞端，与带有空气的1毫升注射器连接。再剪去细管的另一端，在室温下将胚胎推入10%甘油和0.3摩尔蔗糖的PBS解冻液中，放置5分钟后依次移入6%、3%和0%甘油的蔗糖PBS解冻液中，各停留5分钟，最后移至PBS保存液中镜检待用。

试管婴儿胚胎解冻流程是怎么样的呢

冷冻胚胎解冻过程如下：

1、确认身份找出相应麦管，从液氮罐中取出麦管，拿出麦管在室温下解冻30秒。用纸擦去麦管外面的冰，室温解冻时必须仔细检查麦管内是否有气泡、裂缝或者液氮渗漏。

2、将麦管放进30℃水中浴30秒，拿出小心擦干，消毒剪去一端，接上1ml注射器。然后剪去另一端，不可晃动以免造成气泡。

3、小心地将胚胎吹入专用的解冻液器皿中。观察胚胎是否从麦管中被吹了出来，假如没被完全吹出来，应当吸取一点液体再试，因为胚胎也许会黏附在麦管壁上。然后在器皿中孵育5分钟，再将胚胎移入下一个器具中保持5分钟，然后再移入再下一个器具中5-10分钟。

4、将胚胎放进室温解冻液器皿，接着放入37℃器皿中保持10分钟。然后需要检测胚胎存活率并评价胚胎形态。这时的胚胎能够立即进行移植，也能够在培养一段时间后移植。

注意：实验室冷冻胚胎解冻操纵过程对胚胎冷冻成功与否也极为关键。确保在适宜的时间将胚胎移植进入受体子宫内，除此之外，冷冻胚胎既能够在自然周期进行移植，也能够在人工周期移植。

一般状况下，解冻后存活的胚胎在体外培养复苏2-4小时后即可进行移植手术。所以整个解冻过程比较短，但是实际上实验室操作需要遵循十分严格的操作步骤来才行，要不然尽管如今的冷冻胚胎解冻成功虽然十分高，但如果实验室操作有误，也会造成胚胎解冻失败，所以这就要求医院操作人员经验丰富了。

因为在进行试管婴儿的时候将剩余的胚胎冷冻保存，可降低治疗费用、缩减治疗周期时间，提升了治疗成功率，降低试管并发症的发生，所以临床上采用冷冻胚胎的不孕不育家庭十分多，同时对于试管婴儿来说，冻胚移植那就离不开解冻胚胎、复苏胚胎。

关于本次胚胎如何解冻和胚胎解冻后怎么证明还活着的问题分享到这里就结束了，如果解决了您的问题，我们非常高兴。