胚胎冻存 步骤，胚胎怎么冷冻保存

大家好，今天来为大家分享胚胎冻存 步骤的一些知识点，和胚胎怎么冷冻保存的问题解析，大家要是都明白，那么可以忽略，如果不太清楚的话可以看看本篇文章，相信很大概率可以解决您的问题，接下来我们就一起来看看吧！

做试管婴儿都哪些步骤

你好，详细步骤主要如下：

治疗前准备：在进入试管婴儿治疗周期前，不孕患者还需备齐双方身份证、结婚证以及准生证这三项证明材料。另外，就是做好前期的检查，以排除不利于试管婴儿成功的各项因素。

控制性促排卵：一般是采用控制性促排卵来增强与改善女性的卵巢功能，以达到不受自然周期的限制、获得多个健康卵子的目的，提供多个胚胎移植，并尽可能使黄体发育与子宫内膜功能同步。

取卵：最常用的取卵方式是在的局部麻醉下，经阴道B超引导，将取卵针穿过阴道穹窿，直达卵巢吸取卵子，并立即在显微镜下将卵子移到含胚胎培养液的培养皿中，置37度的培养箱中培养。

受精卵的培养：将丈夫在无菌条件下取得的精液，经过处理，使精子具备穿入卵子的能力，与卵子一起在特殊培养液中培养形成受精卵。若受精卵形成且发育正常，一般2-3天后进行胚胎移植。

胚胎移植：受精卵在体外培养48～72小时可发育到8～16细胞期胚胎。此时依据患者的年龄、曾经怀孕与否及胚胎的质量，决定移植胚胎的数目，多余的胚胎可冷冻保存。

细胞生物学:小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

以下是根据NIH老年病研究所提供的英文的R1胚胎干细胞培养protocol整理而成。根据经验作部分修改。

1、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态

培养基

细胞复苏

冻存细胞

明胶包被

细胞传代

2、体外分化

培养基

包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）

体外分化方法

注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol，需要用专用的protocol和培养基。

一般培养——维持ES细胞处于未分化状态

ES细胞培养用含有LIF（白血病抑制因子）和Feed细胞的培养基（高糖）来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。如果在Feed细胞，那么就需要采用MMC进行处理，抑制Feed细胞增殖，但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。下文中暂不提及Feed细胞。Feed细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。

培养基

ES：

配制一20×不含DMEM，HS，LIF的溶液（该溶液也能用于EB培养基——见下文）。分装在50ml离心管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基，0.22μm滤膜过滤。贮存于4℃，时间不要超过2周。

贮存液

DMEM（高糖）

马血清（HS）

L-谷氨酰胺（200mM）

MEM NEAA（10mM）

HEPES（1M）

β-巯基乙醇（55Mm）

PEST

LIF

复苏细胞

细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。

步骤：

1.从液氮中取出一管细胞；

2.将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）；

3.将细胞转移到一15ml Falcon管中；

4.加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；

5.离心3分钟；

6.弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；

7.接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿；

8.孵育。

试管婴儿的八个步骤

试管婴儿是一种辅助生殖技术，是指将卵子和精子在体外受精，再将受精卵移植到女性子宫内，使其发育成胎儿。试管婴儿的成功率较高，但需要经过一系列的步骤。

🔍双方身体检查

第一步：双方身体检查。

🏋️‍♀️双方身体调理

第二步：双方身体调理。

👩‍⚕️女方控制性超排卵

第三步：女方控制性超排卵。

🧬采卵，采精

第四步：采卵，采精。

🔬体外受精，培养

第五步：体外受精，培养。

🌱移植，余胚冻存

第六步：移植，余胚冻存。

🌞黄体支持

第七步：黄体支持。

🤰移植后14天检验是否怀孕

第八步：移植后14天检验是否怀孕。若怀孕成功，继续黄体支持到怀孕3个月。若怀孕不成功，冻存的胚胎解冻，重复第六步移植。

好了，关于胚胎冻存 步骤和胚胎怎么冷冻保存的问题到这里结束啦，希望可以解决您的问题哈！