冷冻胚胎com？冷冻胚胎是什么

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胚胎工程 阶段

有体内受精和体外受精

有性生殖和发育的四个阶段：

⒈有性生殖

①配子形成

②受精作用

⒉个体发育

①胚胎发育

②胚后发育

[编辑本段]胚胎工程的定义

胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。这些技术进一步挖掘动物的繁殖潜力，为优良牲畜的大量繁殖，稀有动物的种族延续提供有效的解决办法。在畜牧业和制药业等领域发挥重要的作用，具有光明的应用前景。

生殖细胞的发生和受精

一、哺乳动物有性生殖和发育的概述

一实例：人的生殖发育过程

二有性生殖和发育的四个阶段：

⒈有性生殖

①配子形成

②受精作用

⒉个体发育

①胚胎发育

②胚后发育

二、配子形成——精子和卵细胞的发生

一精子的发生

⒈时机：从雄性动物的初情期（相当于人的青春期）开始，到生殖机能衰退

⒉场所：睾丸的曲细精管内

⒊过程：

⒋产物：精子

形态：形似蝌蚪，分头、颈和尾三部分

长度在几十微米到几百微米之间（不同种生物精子长度不同）

结构：头部顶端有顶体（由高尔基体发育而来）

头的主要部分是细胞核

尾的基部有线粒体聚集形成的线粒体鞘

特性：尾部能够剧烈摆动，使精子获得运动能力

二卵子的发生

⒈时机：卵泡在胎儿时期形成，从初情期开始有卵子成熟

⒉场所：主要在雌性的卵巢中完成

⒊过程：

⒋产物：卵子

结构：卵子中有营养物质丰富的卵黄（细胞质）

卵子外有由卵丘细胞构成的放射冠

三、受精

一准备阶段

⒈精子的准备——精子获能

成熟的精子在雌性动物生殖道内发生相应生理变化，使得精子获得与卵细胞结合的受精能力的过程

⒉卵子的准备

卵子从卵巢排出进入输卵管，经过2～3小时后才具备与精子受精的能力

二受精阶段

⒈实例：人的受精过程

⑴精子穿越放射冠和透明带（顶体反应）

⑵进入卵黄膜（精卵识别、形成受精膜）

⑶原核形成（精子尾部脱落形成雄原核、卵子完成减数第二次分裂形成雌原核）

⑷配子结合（雌雄原核融合，形成一个含二倍染色体的合子）

⒉特征

⑴受精部位：输卵管的膨大部位

⑵适宜时间：排卵后6～24h

⑶受精条件：精子密度足够大是精卵相遇及融合的前提条件

⑷融合特点：一个卵细胞只与一个精子融合形成受精卵

[编辑本段]胚胎发育的基本过程

一、胚胎发育

一胚胎发育过程（蛙受精卵的发育）

二特征

⒈卵裂期细胞数量不断增加，但胚胎的总体积并不增加，或有所缩小

⒉桑椹胚时期及其以前的细胞，每一个细胞都具有发育成完整胚胎的潜能，属于全能细胞

⒊囊胚中有一个含有液体的囊腔——囊胚腔

⒋原肠胚由三个胚层构成，三个胚层在后期的发育过程中，分化成不同的组织器官，在原肠胚期出现一个新的空腔——原肠腔

⒌着床后，胚胎通过胎盘与母体相连，从母体获得生长发育所需的营养

二、胚后发育

实例：人出生后的发育分期

分期年龄主要发育特征

婴儿期新生儿

初期幼儿期出生后

1个月呼吸等功能开始

循环的调节

中期幼儿期 1月～1岁生长发育迅速、器官功能成熟

后期幼儿期 1～3岁生长减速、步行和随意运动发展

学前期 3～6岁生长慢、神经调节发展、学习发展

童年期女性6～10岁

男性6～12岁以一定速度生长；动作技能熟练；智能发展

青春前期女性10～12岁

男性12～14岁生长速度加快；体重增加快；

内分泌初期分化

青春中期女性12～14岁

男性14～16岁出生后最大生长期；

第二性征出现

青春后期女性14～18岁

男性16～20岁生长降速或停止，肌肉增长；生殖器迅速发育，性成熟

[编辑本段]胚胎工程的技术及应用

一、胚胎移植

一定义：将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之发育成新个体的技术。

二意义：

⒈充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力

⒉缩短雌性优良个体本身的繁殖周期

⒊提高繁殖效率，后代数是自然繁殖的十几倍到几十倍

三基本程序（见教材77页图）

二、胚胎分割

一定义：采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。

二原理：初期胚胎的细胞具有很高的全能性，能够发育成完整个体。来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，拥有相同的优良性状。

三基本程序：

三、体外受精

一卵母细胞的采集和培养

⒈促排卵法：用促性腺激素处理，促雌性动物排卵，从输卵管中冲取卵子

⒉直接获取法：

从已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞，在体外经人工培养为成熟的卵子

从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，在体外经人工培养为成熟的卵子

二精子的采集和获能

⒈精子的采集

⑴假阴道法

⑵手握法

⑶电刺激法

⒉精子的获能

⑴培养法

⑵化学诱导法

三受精

⒈获能的精子和培养成熟的卵子，在受精溶液中完成受精过程

⒉在人工条件下，将精子注入到成熟的卵子中，完成人工授精

[编辑本段]胚胎干细胞的研究及应用

1999年底，在美国《Science》（《科学》杂志）公布的年度世界十大科学成果评选中，“干细胞研究的新发现”荣登十大科学成果之首，而举世瞩目的、耗资巨大的人类基因组计划只居第二位，足见干细胞研究的重要性。

ES细胞技术是一个发展空间极为广阔的研究领域，很多亟待解决的问题，将成为当前乃至未来人们攻坚的热点。

一、胚胎干细胞（ES细胞）的来源和主要特点

（1）ES细胞来源于早期胚胎，是从早期胚胎细胞中分离出来的。

（2）体积较小，细胞核大，核仁明显，具有胚胎细胞的特性；

（3）具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞。

（3）在体外培养条件下，ES细胞可不断增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可以进行某些遗传改造。

二、ES细胞的主要用途

（1）可用于研究哺乳动物个体发生和发育的规律，也是在体外条件下研究细胞分化的理想材料。

（2）ES细胞通过诱导分化可产生新的组织细胞，用于治疗人类的组织损伤和某些顽症。

（3）可通过ES细胞的体外诱导分化，定向培育人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和移植后免疫排斥的问题。

[编辑本段]辅助生育技术的发展史

哺乳动物体外受精技术的研究由来已久，早在1890年，英国胚胎学家Walter Heape和外科医生Samual Ruckley，将安哥拉白色长毛兔两个4-细胞胚胎植入有色短毛雌兔子宫内，生下的6只幼兔中有2只白色长毛兔。宣布胚胎移植的首次成功。1947年，美籍华人张明觉将兔受精卵保存在5℃-7℃，移植后能发育成正常的幼兔。这些研究均是将体内受精卵进行移植，而体外受精却相当困难。1951年，张明觉和Austin观察到哺乳动物的精子获能现象，即精子有能力穿入卵之前，必须经历一系列的生理，生化改变。这样张明觉在其研究的基础上，并结合Heape的胚胎移植技术诞生第一只体外受精—胚胎移植的幼兔。这些开创性的研究为人类体外受精—胚胎移植奠定了基础。

20世纪60年代，人类对卵及卵子成熟的研究积累了丰富的知识。随着腹腔镜发明并将其应用于取卵手术中。1977年Steptoe和Edwards利用腹腔镜取卵，在体外受精，并当受精卵发育到8-Cell胚胎移植入母体子宫内获得妊娠。并于1978年7月，在英国剑桥大学诞生了世界首例试管婴儿路易丝.布朗(Louice Brown)即普通地称为第一代试管婴儿。1985年4月台湾首例试管婴儿诞生。1986年12月，香港首例试管婴儿诞生。我国首例试管婴儿于1988年3月北京医科大学三医院诞生。

[编辑本段]利用胚胎移植繁育马廘

马鹿是国家二级保护动物，随着种群、数量的减少，马鹿出现种群退化、近亲繁殖等现象，胚胎移植是解决这一问题的有效方法之一。

新疆奇台林场马鹿养殖基地是中国唯一的天山马鹿种源保护与繁育基地。 2004年6月19日，新疆奇台林场的马鹿养殖基地共降生7头胚胎移植的小马鹿，其中5头存活。

据奇台林场场长马明奎介绍，与其它小马鹿相比，胚胎移植的小马鹿个头明显较大、身体更为强壮、跑跳等能力更强。

[编辑本段]人工授精技术（体内）

（一）输精前的准备

1、输精器的消毒：输精器预先用清水或2%的碳酸钠溶液洗净，再以蒸汽消毒或用烘干箱干燥灭菌。

2、精液的准备：根据选配计划，选择受配母牛应采用的公牛精液。临输精前，将确认的细管或颗粒精液进行快速解冻（40摄氏度，必要时做活力检查），将输精器用蒸馏水冲洗2-3次，再装入精液。

3、母牛的准备：准确鉴定发情母牛，并将受配母牛保定在输精室配种架内（也可在牛舍内就地配种）。

（二）输精方法：人工授精常用直肠把握子宫颈法和开膣器法。现在大多使用前一种方法，它比开膣器法可提高受胎率10%以上，后一种方法，现已不用。

直肠把握法

操作要领：输精前，输精者须带上塑料或橡胶长臂手套，并在手套外面涂上润滑剂（肥皂液等），右手持输精器。然后左手指合拢呈圆锥状，以螺旋钻似的动作，从肛门缓慢地插入直肠内，先将直肠的宿粪掏出，用清水洗净肛门、会阴及阴门周围，然后再次插入直肠内，隔直肠把子宫颈握住（有软骨样感觉），然后左手臂往下压一下，使阴门张开，或者助手用手指拨开阴门。右手持输精器由阴门插入，先向上倾斜插入一段（约5厘米左右），以避开尿道口，而后平插，当输精器尖端抵达子宫颈外口时，在左右手的协调作用下，让输精器轻轻越过子宫颈，即插到子宫颈内口与子宫体连接部，然后注入精液。注入时将输精器稍微往回拉一点，以避免肌肉堵塞尖端出口。注入后将输精器拉出子宫管再松开授精器胶球，以免吸回精液。实践证明，这种深部授精，精液不易倒流，可以提高受胎率。这是当今国内外普遍采用的一种授精方法。

请问冻胚解冻需要多久

冻胚解冻大概需要3天的时间，成功的几率也很高。冷冻多余的胚胎，冷冻的胚胎还可以解冻复苏，还可以做第二次移植。囊胚培养有五天和六天的，按胚胎发育时间来看，五天要好于六天的，最终还是要看养成的胚胎级别。

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人体胚胎发育的规律

人体胚胎学总论或称人体早期发生，是指从受精至第八周末的发育时期，即胚前期和胚期。此时期的胚胎发育变化甚大，并易受内、外环境因素的影响。人体胚胎学总论的内容包括：生殖细胞和受精，卵裂和胚泡形成，植入和胚层形成，胚体形成和胚层分化，胎膜和胎盘。本章还简述各期胚胎的外形特征和胚胎龄的推算、多胎和联胎，以及胚胎发育的某些机理。 [编辑本段]生殖细胞和受精（一）生殖细胞

生殖细胞（germ cell）又称起配子（gamete），包括精子和卵子，均为单倍体细胞，即仅有23条染色钵，其中一条是性染色体。

1．精子的获能精子中的半数含Y染色体（23，Y），半数含X染色体（23，X）。射出的精子虽有运动能力，却无穿过卵子周围放射冠和透明带的能力。这是由于精子头的外表有一层能阻止顶体酶释放的糖蛋白。精子在子宫和输卵管中运行过程中，该糖蛋白被女性生殖管道分泌物中的酶降解，从而获得受精能力，此现象称获能（capacitation）。精子在女性生殖管道内的受精能力一般可维持1天。

2．卵子的成熟从卵巢排出的卵子处于第二次成熟分裂的中期，并随输卵管伞的液流进入输卵管，在受精时才完成第二次成熟分裂。若未受精，于排卵后12～24小时退化。

（二）受精

受精（fertilization）是精子穿入卵子形成受精卵的过程，它始于精子细胞膜与卵子细胞膜的接触，终于两者细胞核的融合。受精一般发生在输卵管壶腹部。应用避孕套、输卵管粘堵或输精管结扎等措施，可以阻止精子与卵子相遇，从而阻止受精。

当获能的精子与卵子相遇时，它首先与卵子周围的放射冠接触。这时精子顶体的前膜即与表面的细胞膜融合，继而破裂形成许多小孔，顶体内含的酶（酸性水解酶）逐渐释放出来。精子顶体的这种变化为顶体反应（acrosome reaction）。释放的顶体酶先解离放射冠的卵泡细胞，继而分解透明带，形成一个精子穿过的通道，精子则与卵子直接接触，是受精的开始。

受精开始时，精子头侧面的细胞膜与卵细胞膜融合，随即精子的细胞核和细胞质进入卵内。精子进入卵子后，卵子浅层细胞质内的皮质颗粒立即释放溶酶体酶样物质，使透明带结构发生变化，称为透明带反应，从而阻止其它精子穿越透明带。在极少的情况下，两个精子同时进入卵子形成三倍体细胞的胚胎，此种胚胎均流产或出生后很快死亡。精子入卵后，卵子迅速完成第二次成熟分裂。此时精子和卵子的细胞核分别称为雄原核（male pronucleus）和雌原核（female pronucleus）。两个原核逐渐在细胞中部靠拢，核膜随即消失，染色体混合，形成二倍体的受精卵（fertilized ovum），又称合子（zygote）。

受精的意义在于：①受精使卵子的缓慢代射转入代谢旺盛，从而启动细胞不断地分裂；②精子与卵子的结合，恢复了二倍体，维持物种的稳定性；③受精决定性别，带有Y染色体的精子与卵子结合发育为男性，带有X染色体的精子与卵子结合则发育为女性；④受精卵的染色体来自父母双方，加之生殖细胞在成熟分裂时曾发生染色体联合和片断交换，使遗传物质重新组合，使新个体具有与亲代不完全相同的性状。

受精后，母体血浆内很快出现一种免疫抑制物，称早期妊娠因子（early pregnancy factor），它是目前检查早期妊娠的一种指征。 [编辑本段]卵裂和胚泡形成受精卵由输卵管向子宫运行中，不断进行细胞分裂，此过程称卵裂（cleavage）。卵裂产生的细胞称卵裂球（blastomere）。随着卵裂球数目的增加，细胞逐渐变小，到第3天时形成一个12～16个卵裂球组成的实心胚，称桑椹胚（morula）。

桑椹胚的细胞继续分裂，细胞间逐渐出现小的腔隙,它们最后汇合成一个大腔，桑椹胚转变为中空的胚泡。胚泡（blastocyst，又称囊胚）于受精的第4天形成并进入子宫腔。胚泡外表为一层扁平细胞。称滋养层（trophoblast），中心的腔称胚泡腔（blastocoele），腔内一侧的一群细胞，称内细胞群（inner cell mass）。胚泡逐渐长大，透明带变薄而消失，胚泡得以与子宫内膜接触，植入开始。 [编辑本段]植入和胚层形成此阶段的主要变化是：胚泡植入子宫内膜，获得进一步发育的适宜环境和充足的营养供应；内细胞群分化为由内、中、外三个胚层构成的胚盘，它是人体各器官和组织的原基；胎膜与胎盘也渐形成和发育。

（一）植入

胚泡逐渐埋入子宫内膜的过程称植入（implantation），又称着床（imbed）。植入约于受精后第5～6天起始，第11～12天完成。植入时，内细胞群侧的滋养层先与子宫内膜接触，并分泌蛋白酶消化与其接触的内膜组织，胚泡则沿着被消化组织的缺口逐渐埋入内膜功能层。在植入过程中，与内膜接触的滋养层细胞迅速增殖，滋养层增厚，并分化为内、外两层。外层细胞间的细胞界线消失，称合体滋养层（syncytiotrophoblast）；内层由单层立方细胞组成，称细胞滋养层（cytotrophoblast）。后者的细胞通过细胞分裂使细胞数目不断增多，并补充合体滋养层。胚泡全部植入子宫内膜后，缺口修复，植入完成。这时整个滋养层均分化为两层，合体滋养层内出现腔隙，期内含有母体血液。

植入时的子宫内膜处于分泌期，植入后血液供应更丰富，腺体分泌更旺盛，基质细胞变肥大，富含糖原和脂滴，内膜进一步增厚。子宫内膜的这些变化称蜕膜反应，此时的子宫内膜称蜕膜（decidua）。根据蜕膜与胚的位置关系，将其分为三部分：①基蜕膜（decidua basalis），是位居胚深部的蜕膜；②包蜕膜（decidua capsularis），是覆盖在胚宫腔侧的蜕膜；③壁蜕膜（decidua parietalis），是子宫其余部份的蜕膜。

胚泡的植入部位通常在子宫体和底部，最多见于后壁。若植入位于近子宫颈处，在此形成胎盘，称前置胎盘（placenta previa），分娩时胎盘可堵塞产道，导致胎儿娩出困难。若植入在子宫以外部位，称宫外孕（ectopic pregnancy），常发生在输卵管，偶见于子宫濶韧带、肠系膜，甚至卵巢表面等处。宫外孕胚胎多早期死亡。

胚泡的植入是以母体性激素的正常分泌使子宫内膜保持在分泌期为基础的，透明带消失和胚泡适时进入宫腔是植入的条件。若母体内分泌紊乱或内分泌受药物干扰，子宫内膜周期性变化则与胚泡的发育不同步，子宫内膜有炎症或有避孕环等导物，均可阻碍胚泡的植入。

人卵体外受精（fertilization in vitro,VIF）技术建立于1969年。用IVF技术获得的受精卵在体外发育到桑椹胚或早期胚泡，再移植到子宫内的技术称胚胎移植（embryo transfer,ET）。应用IVF和ET技术于1978年诞生了第一例“试管婴儿”（test tube baby），我国大陆于1988年春天诞生了首例“试管婴儿”。IVF和ET技术的开展，可以解决因输卵管堵塞而不能怀孕妇女的生育问题。目前，体外受精获得的早期人胚，经冷冻保存后再移植入子宫的胚胎也获得成活。

（二）胚层形成

在第二周胚泡植入时，内细胞群的细胞也增殖分化，逐渐形成一个圆盘状的胚盘（embryonic disc），此时的胚盘由内、外两个胚层。外胚层（ectoderm）为邻近滋养层的一层柱状细胞，内胚层（endoderm）是位居胚泡腔侧的一层立方细胞，两层紧贴在一起。继之，在外胚层的近滋养层侧出现一个腔，为羊膜腔，腔壁为羊膜。羊膜与外胚层的周缘续连，故外胚层构成羊膜腔的底。内胚层的周缘向下延伸形成另一个囊，即卵黄囊，故内胚层构成卵黄囊的顶。羊膜腔的底（外胚层）和卵黄囊的顶（内胚层）紧相贴连构成的胚盘是人体的原基。滋养层、羊膜腔和卵黄囊则是提供营养和起保护作用的附属结构。此时期的胚泡腔内出现松散分布的胚外中胚层细胞。它们先充填于整个胚泡腔。继而细胞间出现腔隙，腔隙逐渐汇合增大，在胚外中胚层内形成一个大腔，称胚外体腔。胚外中胚层则分别附着于滋养层内面及卵黄囊和羊膜的外面，羊膜腔顶壁尾侧与滋养层之间的胚外中胚层将两者连接起来。称体蒂（body stalk）。

至第3周初，胚盘外层细胞增殖，在胚盘外胚层尾侧正中线上形成一条增厚区，称原条。原条（primitive streak）的头端略膨大，为原结（primitive node）。原条的出现，胚盘即可区分出头尾端和左右侧。继而在原条的中线出现浅沟，原结的中心出现浅凹，分别称原沟和原凹。原条深面的细胞则逐渐迁移到内外胚层之间，形成松散的间充质。原条两侧的间充质细胞继续向侧方扩展，形成胚内中胚层（intraembryonic mesoderm），它在胚盘边缘与胚外中胚层续连。从原结向头侧迁移的间充质细胞，形成一条单独的细胞索，称脊索（notochord），它在早期胚胎起一定支架作用。脊索向头端生长，原条则相对缩短，最终消失。若原条细胞残留，在人体骶尾部可分化形成由多种组织构成的畸胎瘤。

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