胚胎7细胞碎片10 8细胞10碎片的胚胎能移植成功吗

对于胚胎7细胞碎片10，你了解多少?是不是很想知道8细胞10碎片的胚胎能移植成功吗，下面，佳运育儿网小编就带大家一起来详细的了解一下，相信会对大家有所帮助，下面我们就一起来看看吧。

mefs是什么细胞

小鼠胚胎的成纤维细胞系，可以作为胚胎干细胞的饲养层以外，也是研究天然免疫的重要材料。

小鼠胚胎成纤维细胞的富集

1、给13-14天的孕鼠注射大约0.5ml阿佛丁。当鼠麻醉后，实施断颈法处死小鼠。

2、用70％乙醇擦拭腹部，把皮肤向后拉，暴露出腹膜。用消毒过的工具，剪开腹壁以暴露出子宫角。将子宫角移到10cm的皿里。用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。

3、用剪刀剪开每一测的胚囊,并将胚胎移到培养皿中。

4、用两副钟表镊子将胎盘和膜与胚胎分离开，分离后切除内脏（所有深色的东西）。将胚胎转移到(有盖)培养皿中，用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。

5、用带有弯钩的眼科剪将组织剪碎，当你剪的很累以致于不能再剪的时候，加入2ml胰蛋白酶/EDTA继续剪。再加入另外5ml胰蛋白酶/EDTA，并在37℃孵育大约20分钟。此时，返回至第一步，对下一只鼠进行操作。

6、执行1－4步，到将胚胎置于胰蛋白酶/EDTA中这一步。

7、吹打胰蛋白酶/EDTA中的胚胎，直到有很少的组织物残留。将皿放回培养箱再孵育10分钟。

8、用20ml培养基以终止胰蛋白酶/EDTA的消化，将皿中的物质转移至50ml锥形管中。

9、混匀管内的物质，加入到含有20ml培养基的T75培养瓶中。每个培养瓶中装大约3个胚胎。

10、将这些培养瓶放在培养箱中37℃培养过夜。

11、将胚胎置于PBS中，并重复第5步。

12、第二天更换培养基，以去除碎片和中毒的细胞及其分泌的物质。

13、当培养瓶中的细胞长到80-90%汇合时并仍处于指数生长期时，是冻存细胞的最佳时期。一般说来，这发生在准备胚胎的第二天。这可能或早或晚发生，所以请注意观察你的培养瓶。

注释：

我们已用CF－1品系的鼠制备了成纤维细胞。

培养基成分：

88％ DMEM

10％ FBS

1％ NEAA

1%双抗

对于新建立的细胞系，要对样本进行支原体检测。

小鼠胚胎成纤维细胞的消化/传代

1、移去MEF培养基

2、用5ml不含钙镁离子的PBS洗涤细胞（以去除胰蛋白酶的抑制物）。

3、每个培养瓶里加入1.5ml的胰蛋白酶/EDTA（0.05%的胰蛋白酶），消化5min。

4、为了使细胞分散开，轻轻吹打细胞。

5、每加入1ml的胰蛋白酶/EDTA，加入至少1ml的MEF培养基以终止胰蛋白酶的消化。

6、将细胞悬液加入到15ml的锥形管中，吹打几次，使细胞分散为单个的。

7、在新的T75培养瓶中加入10mlMEF培养基。

8、将细胞悬液分装到新的T75培养瓶中，放在37℃培养箱中进行培养。

注释：

MEF培养基成分：

89% DMEM(Gibco# 12100-046)

10% FBS(Gibco# 16000-044)

1% NEAA(Gibco# 11140-050)

MEF每传一代就会生长得较慢些。你第一次传代的比例可以是1:5，但是最后一次的传代（第4代或第5代）比例应该是1:2。

小鼠胚胎成纤维细胞的冻存

重悬培养基：

80% DMEM

20% FBS

1% NEAA

冻存培养基：

60％ DMEM

30％ FBS

20％ DMSO

1、用不含钙镁离子的PBS洗一次细胞。

2、加入胰蛋白酶/EDTA37℃消化大约5min。

3、将细胞吹打下来。

4、加入与胰蛋白酶/EDTA等体积的培养基以终止胰蛋白酶的消化。

5、吹散大块组织。如果还有大块组织存在，可将悬液加入到50ml的管中使其沉淀。

6、取上清液，将其分装到锥形管中，1000rpm离心5min。

7、每个冻存瓶中加入0.5ml（冻存液的一半体积）的重悬培养基重悬细胞。

8、逐滴加入等体积的（0.5ml/瓶）冻存培养基，混匀。现在DMSO的浓度是10％。

9、每个冻存瓶中加入1ml的细胞。

10、迅速将细胞转移到冻存的容器中，-70℃冻存过夜。（细胞不能长时间放置在室温而含有DMSO的情况下）

11、第二天将细胞放于液氮中长期保存。

注释：

提前标注好冻存细胞的以下信息：

细胞系名称

传代的代数

冻存细胞的数目

日期

Initials

注明冻存/解冻形式

小鼠胚胎成纤维细胞的解冻/复苏

1、将冻存瓶从液氮中取出。

2、放在37℃水浴中快速解冻，being careful not to immerse the vial above the level of the cap.

3、当仅还有一点冰晶残留时，用95％的乙醇消毒冻存瓶的外面，并将其置于hood中。（为什么用95％的乙醇消毒？hood是什么？）

4、轻轻地上下翻转细胞一次，将它们放入15ml锥形管中。

5、想管中逐滴加入10ml培养基。这一步操作不能少于两分钟。做快了对细胞将是一种打击，你将得到比其他方法具有更低生活能力的细胞。

6、1000rpm离心5min。

7、将细胞重悬于10ml培养基中，然后放入T75培养瓶中。

8、放入37℃培养箱。

9、注明冻存/解冻的形式，以更新数据。

胚胎质量等级7c一级好不好

一级胚胎：细胞大小均等，透亮，胞质无颗粒，碎片0%-5%。

二级胚胎：细胞大小略不均，胞质有颗粒现象，碎片6%-20%。

三级胚胎：细胞大小明显不均，胞质有明显颗粒现象，碎片21%-50%。

四级胚胎：细胞大小严重不均，胞质有严重颗粒现象，碎片>50%。

通常分裂期间，很快分裂进入8、10、12个细胞阶段的一般来说都是健康的;分裂球光滑、均匀、无粗糙和颗粒感;分裂球呈卵圆形，对称，并与其他列球相连，圆形或有断片裂的胚胎，只有在需要满足理想的数量时，才可以移植;卵裂球的核只有一个，具有明显的结构，不能具有两个或结构不清。

胚胎碎片的前世今生

导读：

在辅助生育技术领域，胚胎质量的优劣是决定试管婴儿移植能否成功的决定性因素之一。在临床工作中，有不少反复IVF失败夫妇的胚胎反复出现大量的、不可预测的胞浆碎片。再精确的IVF培养体系也无法完美的模拟母体真实环境，胚胎不能适应体外培养环境可能是造成大量胞浆碎片的原因之一。

关于胚胎碎片的描述：

胚胎碎片是人类早期胚胎在体外发育过程中的常见现象，是从受精卵或早期胚胎中排出的由细胞膜包裹的、没有细胞核的胞浆结构，这些胞浆结构含有或不含有细胞器，呈大小不一的圆球形/椭圆球形/不规则形。

胚胎碎片生成的机制：

碎片的生成是胚胎细胞凋亡的结果。当胚胎遇到自身遗传学损伤或不良的体外环境时，会激活并启动DNA修复的自我保护机制，当问题持续变得严重不能解决时，胚胎细胞可通过凋亡机制去除DNA损伤细胞，避免这些遗传损伤传递给后代。

所以碎片越多的胚胎，生长潜力可能越差，这成了判断胚胎好差的一个重要标志。

胚胎碎片形成的因素：

大量研究表明，胚胎碎片的产生与母体因素、卵子及精子质量、培养环境及操作有关。

1.母体因素：有些不孕患者体内存在某些病理因素，如输卵管积水及子宫内膜异位症，炎性积液/子宫内膜组织中存在各种负面因子，可影响胚胎正常发育，导致胚胎产生大量细胞碎片。

2.卵子质量：卵子质量与受精率、卵裂率及优胚率呈正相关。质量差的异常卵子发育而来的胚胎发育潜能差，染色体非整倍体率比例也升高，碎片形成也明显增高。

3.精子质量：目前认为人类胚胎早期发育主要由卵子携带的母源性因子调控，随着胚胎的不断发育，胚胎基因组被激活，父源性效应逐渐体现出来。如精子DNA损伤严重，超过了卵母细胞和胚胎的DNA修复能力时，就会影响受精后胚胎的发育，导致胚胎碎片增多，甚至胚胎发育阻滞。

4.促排卵药物（方案）：促排卵药物（方案）可影响胚胎质量。研究表明，不同患者所适合的促排卵方案也各不相同；同一患者采用不同的促排卵药物（方案），卵子数目不同，所获得的卵子受精后，形成的胚胎碎片发生率可出现差异。

5.温度：卵子和胚胎对温度十分敏感。一般来说，IVF实验室常规工作中涉及人卵及胚胎的操作过程都要求保持37℃恒温。但日常实验室工作中难以避免极短时间胚胎暴露在室温的情况，如胚胎的传递过程以及卵子或胚胎的冷冻解冻过程等等。温度影响纺锤体的解聚和聚合状态，其异常会影响受精卵第二极体的排出，原核的迁移，从而必然影响卵母细胞和受精卵分裂的正常进行，导致胚胎碎片形成。

6.氧自由基：活性氧是有氧代谢的重要产物，正常情况下，活性氧的产生和清除保持动态平衡，当抗氧化能力下降，或氧化产物过多时，氧化损伤可直接影响细胞诱发凋亡，形成细胞碎片。

7.胚胎的培养方式：胚胎发育的环境与其发育潜能及胚胎质量有密切关系。生理状态下，胚胎在女性生殖道内完成种植前发育的全过程，胚胎暴露在输卵管液或子宫液中，这些生理体液不仅含有各种营养成分和活性物质如生长因子，他们共同促进胚胎发育。

在IVF-ET中，胚胎的体外培养过程脱离了生殖道的生理环境，只能依靠有限的自分泌独自承担维持胚胎发育的重要作用，胚胎的发育将受到一定的影响。目前多采用多胚培养或序贯培养等方式，增加培养基内内胚源性因子的浓度，使胚胎的自分泌在一定程度上弥补不足，从而获得较好的胚胎发育效果，并减少胚胎碎片的形成，提高优质胚胎率。

胚胎碎片能够被预防和降低吗？

根据以上所述胚胎碎片形成的相关因素，理论上我们可以采取相应的措施来预防和降低胚胎碎片的发生率：

1.个体化地设计适宜的促排卵方案，提高卵子的质量；

2.积极纠正输卵管积水、子宫内膜异位症等女方病理状态；

3.改善胚胎实验室培养环境和条件，增加配子胚胎操作人员的熟练程度，减少配子和胚胎的暴露时间；

4.将胚胎与输卵管液、颗粒细胞、子宫内膜细胞、及干细胞共培养，在胚胎培养基中添加生长因子及抗凋亡物质等。

随着科学技术的进展，我们对胚胎发育的规律必将了解得越来越深入，相应的预防手段也会不断提高和优化。

最后的话：

在取卵后的第三天，正常受精且发育速度正常的胚胎会发育至6~8个细胞，甚至融合的胚胎。卵裂球大小均一、碎片无或小于10%，这些胚胎定义为高评分胚胎。其他胚胎（如发育速度过慢，碎片过多）则定义为非高评分胚胎。非高评分胚胎不一定都是不好的胚胎，对于碎片过多的胚胎也可进行囊胚培养，延长他们的培养时间以淘汰发育潜能较差的胚胎。

文章分享结束，胚胎7细胞碎片10和8细胞10碎片的胚胎能移植成功吗的答案你都知道了吗？欢迎再次光临本站哦！