植入前胚胎遗传学诊断(PGD)技术，遗传学诊断技术有哪些

大家好，今天来为大家分享植入前胚胎遗传学诊断(PGD)技术的一些知识点，和遗传学诊断技术有哪些的问题解析，大家要是都明白，那么可以忽略，如果不太清楚的话可以看看本篇文章，相信很大概率可以解决您的问题，接下来我们就一起来看看吧！

第三代试管婴儿中的PGD和PGS分别是什么技术

第三代试管婴儿技术应用越来越广泛，PGD/PGS的需求也越来越多，如何读懂这一辅助生育技术，了解试管婴儿操作过程中最为关键的一步，不再只是临床医师们的必修课，也成为许多希望成为父母的夫妻急需解决的问题，下面我们一起来了解一下：

胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation Genetic Diagnosis)，主要用于检查胚胎是否携带有遗传缺陷的基因。在精子卵子结合形成受精卵并发育成胚胎后，在其植入子宫前使用PGD技术进行基因检测，使体外授精的试管婴儿避免一些遗传疾病。目前植入前遗传诊断已经能诊断一些单基因遗传病，比如遗传性耳聋、多囊肾等疾病。

胚胎植入前遗传学筛查(Preimplantation Genetic Screening)，在胚胎植入之前，利用PGS对早期胚胎进行染色体数目和结构异常的检测，主要检测胚胎的染色体结构、数目的情况是否正常。

为了让非专业人士更好地理解PGD/PGS，我们不妨做个形象的比喻。人类正常细胞有46条染色体，比喻为46条珍珠项链；每条染色体上有很多个基因（总共数万个），比喻为项链上的珍珠。项链（染色体）的数目是否正常决定了个体是否能够存活，或者发生染色体遗传病；珍珠（基因）是否正常决定了是否发生单基因遗传病。PGD就像是珠宝店老板，它关注每一个珍珠是否有瑕疵；PGS就像是珠宝店保安，它的职责只是看好这46条项链，看看有没有多一条或者少一条，有时也能看到某条项链是不是明显多出来一截或者少了一段（大片段重复或缺失），至于单个珍珠的状态，就不是它的职责范围了。

PGD/PGS都是对实验室要求非常高的胚胎筛查/诊断技术，目前我国已经利用PGD/PGS技术成功移植健康胚胎，让很多有单基因遗传病或高龄、反复流产的准妈妈拥有了健康的宝宝。

在体外受精过程中，医生通过激素来刺激女性的卵巢。卵巢产生多个卵子，随后可由生殖科专家人工提取。在实验室中，专家利用伴侣或供体的精子让女性的卵子受精，创造出胚胎。但如何挑选出健康具有活力的胚胎进行植入并不容易，这需要对胚胎的遗传物质进行研究来检测胚胎是否有某些基因的改变。

当一对夫妇知道一方或双方是遗传病的携带者，或家族中的某个人患有遗传病，或他们已经有了一个患病的孩子时，就可以在进行体外受精结合胚胎移植技术时使用这种技术。这与传统产前诊断如超声、羊水穿刺等先怀孕后诊断的方法不同，是在胚胎期即接受检测和筛选，即先诊断后怀孕。

目前PGD的应用主要集中在十种单基因性疾病，包括常染色体隐性遗传性疾病，如地中海贫血、囊性纤维化、脊肌萎缩症、镰刀型红细胞贫血，常染色体显性遗传性疾病，如亨廷顿病、强直性肌营养不良症和腓骨肌萎缩症，性连锁性疾病包括脆性X染色体综合征、进行性肌营养不良和血友病等，其多应用于具有明确遗传缺陷的病人。

另外PGS则适用于：高龄（＞35岁）、既往非整倍体妊娠、反复体外受精（IVF）失败、反复流产、严重的男性不育等因素导致的不孕不育。

进行适应症评估→夫妇双方生殖门诊做治疗前常规检查→确定不孕不育原因、告知需行PGD，选择治疗方案→必要的辅助检查和评估→查验相关证件，签署知情同意书→进入体外受精-胚胎移植治疗周期→采用FISH、array-CGH或基因测序技术→根据检测结果和胚胎发育情况选择正常胚胎移植→妊娠结局随访→孕期管理，产前检查→分娩及随访。具体事宜可咨询生殖医学中心医护人员。

1、患有《母婴保健法》规定的不宜生育的疾病；2、患有《母婴保健法》规定的、目前无法进行PGD/PGS的疾病；3、男女任何一方患有严重的精神疾病、泌尿生殖系统急性感染、性传播疾病；4、有IVF-ET其他禁忌症的夫妇。对于需行PGD/PDS的夫妇首先到生殖医学中心进行适应症的评估，夫妇双方做治疗前常规检查，确定不孕不育的原因然后选择合适的治疗方案，之后再进行后续的相应流程。

专家是这么说的：“50%以上的流产都是由于染色体异常引起的，30岁以下的女性在形态学上来说是优质胚胎，但仍然有30%左右经过活检显示染色体异常，所以在有条件有资质有指征的情况下，我们还是比较推荐做第三代试管婴儿。这部分病人如果没有像多囊肾这样明确的单基因遗传病，就做PGS，即染色体筛查。筛查后我们就选择染色体正常的胚胎来进行移植，比如我们最常见的染色体数目异常的21三体染色体，俗称唐宝宝。所以有了第三代试管婴儿，这个技术不仅对单基因遗传病植入前的诊断有帮助，对那些高龄的，反复移植失败的患者也有很大的意义。

虽然PGD和PGS可以避免常规产前诊断所带来的人工流产或引产，但在实际临床应用中，该技术仍然存在许多问题值得重视。PGD和PGS是通过对胚胎进行侵入性操作获得最终诊断，对子代需要长期大样本的随访。

什么是PGD或者什么是移植前遗传学诊断

植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)技术的发展给辅助生殖技术(assistedreproductivetechnology,ART)带来了福音。PGD指对诊断明确的疾病如染色体疾病、单基因疾病等在胚胎植入前进行针对性诊断。单基因疾病患者或者携带者可以通过单基因疾病PGD技术,植入不携带疾病基因的胚胎;染色体异常如相互易位、罗氏易位、倒位等导致反复流产的患者通过染色体PGD技术,植入染色体正常或平衡的胚胎以降低流产风险。高龄(advancedmaternalage,AMA)、反复流产(recurrentspontaneousabortion,RSA)、反复植入失败(recurrentimplantationfailure,RIF)、严重男性因素患者因为染色体非整倍体发生率增高,学术界提倡对这部分人群进行植入前遗传学筛查(preimplantationgeneticscreening,PGS),目的是筛查23对染色体非整倍体,降低流产风险,提高成功几率。但因为PGS导致异常胚胎的遗弃,可能使妊娠率、活产率降低,活检过程移除细胞损伤可能影响胚胎发育潜能,活检胚胎可能需要全部胚胎冷冻而增加了冷冻复苏风险等原因,在国际上引起了巨大争议。目前国内并没有PGS相关指南,亟需规范。本文对PGD/PGS争议及最新的指征进展进行综述。

1 PGD/PGS技术发展简史

早在上世纪70年代末期ART引起世界瞩目之时,就有学者提出通过该技术筛查异常胚胎以降低流产风险的设想。随后不同学者提出可通过活检极体、1~2-细胞卵裂球细胞或者几个滋养外胚层细胞进行染色体检测。1990年,英国学者进行了首例X连锁隐性遗传病PGD,卵裂球活检后通过PCR方法扩增Y染色体特异序列进行胚胎性别选择,植入女性胚胎,获得临床妊娠,开启了ART新纪元[1]。1992年双色荧光原位杂交法(fluorescentinsituhybridization,FISH)作为另一单基因疾病性别选择方案,应用X及Y染色体特异性探针进行性别选择,并且可检测X及Y染色体非整倍体[2]。1995年,基于非整倍体与女性高龄、流产的相关性,多色FISH-PGS登上PGD舞台[3],主要对高龄女性进行几条染色体的非整倍体筛查,开创了PGS时代,并得到了推广。但FISH技术探针数目有限,荧光PCR、全染色体染色等技术可同时进行数目较多(9~10)染色体的PGS检测,使人们有了更好的选择[4]。由于亚端粒探针的研究,相互易位PGD方法也开始发展[5],极大地降低了这部分人群的流产风险。各种单基因疾病的PGD方法也在这段时间进展迅速。2001年基因芯片、2002年比较基因组杂交法、2003年单细胞测序法、qPCR等全染色体筛查(comprehensivechromosomescreening,CCS)技术进入人们的视野。2004年后,基因芯片-PGS的报道开始增加,并于2010年后成为国际上大多数生殖中心的主要PGD/PGS技术[6],单核苷酸多态(SNP)基因芯片可以快速简单地同时进行多种单基因疾病PGD,并同时可行23对染色体非整倍体筛查[7]。近年来,高通量测序技术可能成为最有潜力PGD/PGS技术。

2 PGS不同指征提出

PGD/PGS指征始终与分子遗传技术发展相适应。虽然PGD/PGS发展时间较短,但在PGD/PGS领域各种新的分子生物学技术临床转化速度非常快,目前PGD/PGS已成为ART技术的重要组成部分,极大地改变了ART面貌,使ART技术从单纯解决不孕不育问题转为成为优化妊娠结局的有利技术,并有可能对所有ART人群应用。1990年,PGD国际

工作组(InternationalWorkingGrouponpreimplantationgenetics)成立,其工作是对全球PGD的工作进行总结和指导。1997年,欧洲人类生殖与胚胎学会(ESHRE)PGD工作组成立,提出对高危人群进行PGS以提高成功率,并且每年进行数据统计以跟进PGD最新进展。2002年PGD国际学组(PGDIS)成立,并于2004年发表了PGD技术指南[8],该指南首次结合ART中心建立指南及PCR/FISH实验指南对PGD的各个环节给出指导意见,为建立高效有序的PGD中心提供了国际性指导方案,但是对PGD/PGS指征未给出明确的指导意见。2005年,ESHRE的PGD工作组在PGDIS指南的基础上进一步给出了PGD/PGS纳入指征指南,更具有实用性[9]。指征分为建议纳入及不建议纳入两类。PGD建议纳入诊断明确的、严重致畸或致残性且遗传可能性大(染色体重排可能性>10%;单基因遗传比例25%~50%)的单基因疾病;易位型染色体问题;HLA配型且已有干细胞治疗手段的疾病列入遗传相关指征。PGS建议纳入RSA>2次,每个中心可依地区、国家规定自行决定次数;RIF>3次移植高级别胚胎失败;或者多次移植累计达10个胚胎失败;AMA>36周岁。但是任何可能因卵巢刺激、卵泡穿刺、妊娠而产生并发症风险高的女性都建议不进行ART,生育力低下如AMA女性(40~45岁以上年龄)、基础FSH值>15IU/L、体质量指数>30kg/m2及其他不适合进行ART的疾病均不建议纳入,具体来说,窦卵泡数(AFC)数目<7个,胚胎质量差不考虑。这一版本指南没有将男性因素不育作为PGS指征,是否将男性因素不育列为PGS指征争议较大。2006年,国际上还是倾向将严重男性因素不育作为PGS指征[10],并在多中心实践,主要原因为严重男性因素可导致胚胎染色体异常几率升高[11]:胚胎原发性染色体异常如三体、单体几率及性染色体异常几率增加;梗阻性与非梗阻性无精子症患者胚胎PGS结果显示非整倍体率均高于50%[12];严重少弱精子症患者的精子与对照相比非整倍体率显著升高[13];卵泡质内单精子注射(intracytoplasmicsperminjection,ICSI)/睾丸精子获取(testicularspermextraction,TESE)-PGS后妊娠结局明显改善[14];补救ICSI后胚胎染色体异常高发,进行活检及PGS可有效地改善妊娠结局[15-16];男性年龄是否与胚胎非整倍体发生相关尚无定论,但一项基于胚胎的研究表明高龄男性(>50岁,独立于女性年龄因素)囊胚形成率降低,胚胎非整倍体发生率显著增高[17]。男性因素对胚胎的影响仍需进一步研究,是否需要将补救ICSI及高龄男性纳入PGS尚无定论。

3 PGS指征争议

RSA、RIF、AMA、严重男性因素四指征也是目前进行PGS的主要医学指征。PGS一开始的设想为降低因染色体异常带来的植入失败、流产、引产及出生缺陷风险,高龄是女性妊娠结局较差的因素之一,也是最先提出的PGS指征,但一部分ART中心实践后显示,PGS可能减少了部分染色体异常的风险,但并未改善妊娠结局,而且降低了活产率。有2篇重要的针对AMA女性PGS效果的前瞻性队列研究均显示[18-19],与对照组相比,PGS组可移植胚胎数目明显降低,持续妊娠率明显降低,活产率明显降低。这2篇文章一经发表便引起巨大争议,也动摇了国际社会对PGS的信心,直接导致2007年后PGS周期数的直转急下[20]。与此同时,针对RSA、RIF、男性因素指征进行的随机病例对照或者回顾性分析均不支持PGS有提高妊娠率的效果[21-23]。

虽然PGS负面评价不断,但大多数学者仍然认为PGS对妊娠结局有正面影响,主要集中在以下几个方面:①虽然活产率无明显提高,但流产率、多胎率有明显下降;②AMA女性PGS极大地降低了唐氏综合征发生风险,>40岁高龄女性PGS更为经济[24];③PGS可减少高龄女性因反复流产造成的情感创伤,并降低中孕期流产风险;④部分人群还是可见明显的妊娠结局改善。

由于2007年前大多数ART-PGS使用卵裂球细胞活检+有限染色体FISH技术(PGS#1),大多数学者认为可能该技术的局限导致了PGS临床效果的差异。卵裂球活检有较高的局限性:①可能对胚胎发育潜能影响较大;②可能因活检或者固定过程导致细胞核碎裂、溶解致结果不准确;③早期胚胎嵌合体多发,卵裂球结果可能错误率较高。极体活检FISH-PGS后持续妊娠率提高,也从另一方面提示可能卵裂球活检对胚胎发育潜能的影响。而FISH技术局限性也很多:①FISH信号的解读困难;②FISH探针不能覆盖全部染色体;③不同指征人群可能产生非整倍体机制不同,导致FISH-PGS结果差异[25]。对Mastenbroek等[26]发表在新英格兰杂志上的结果进行深入分析后,部分学者认为该团队经验不足,可能活检技术、细胞固定技术、FISH技术、FISH报告错误、患者选择偏倚造成最终结论不准确。基于卵裂球活检及FISH技术的局限性,国际社会开始提倡改变活检方式,同时进行CCS,终止FISH-PGS[27-28]。

4 PGS2.0的提出

PGS#2(2.0)与FISH-PGS(PGS#1)区别:①第5/第6日(D5/D6)囊胚滋养外胚层活检或极体活检,不再采用第3日(D3)卵裂球活检;②采用基因芯片或者其他技术进行CCS,弃用FISH技术[29-30]。2010年ESHRE的PGD工作组呼吁评估PGS2.0临床效果[31],得到许多支持,随后CCS有利于ART妊娠结局的报道呈爆发式增长:卵裂球活检+比较基因组杂交基因芯片(aCGH)显著提高妊娠率,降低多胎妊娠及流产率[32];aCGH准确性较FISH提高,且植入率、妊娠率提高[33];time-lapsemonitoring结合aCGH-PGS较单纯PGS显著提高妊娠率[34-35];CCS结合囊胚移植显著提高了妊娠率、持续妊娠率、活产率,降低了流产率[36],且多胎风险降低;AMA(40~43岁女性)、RSA人群临床效果也令人满意[37-38]。美国2011—2012年PGS大数据分析显示>37岁女性PGS后每周期活产率及每移植周期活产率较对照组显著提高[39];一些小型前瞻性研究显示[40],CCS显著提高预后较差女性的植入率与妊娠率。

PGS2.0主要指征同2005年ESHRE的PGD工作组发布指征,但增加了男性因素:精子常规检查异常;精子基因组衰

减(spermgenomedecay,SGD),包括染色体碎片化增加,染色质分散,非整倍体率增加等。这些男性可通过ICSI生育,但胚胎发生异常几率可能增高,应加入PGS指征。具体为:①精液指标异常需要ICSI助孕进行PGS[严重精子减少(<5×106/mL);梗阻性或非梗阻性无精];②经皮TESE-ICSI。次要指征有:前次偶发染色体非整倍体流产;胚胎质量较差;选择性单胚胎移植。

2015年,一些IVF中心报道不加选择对所有IVF患者进行PGS显著提高了妊娠率[41],开始了是否对所有IVF患者进行PGS的争论。鉴于高通量测序技术的快速发展及利用胚胎培养液游离DNA的无创PGS的提出[42],未来有可能实现对所有胚胎进行损伤小但快速准确的染色体筛查。

5 PGS2.0的局限性

虽然目前PGS2.0是选择胚胎、改善妊娠结局的一种较好的方法,其局限性也显而易见:①活检可能带来胚胎损伤、植入潜能下降、表观遗传变化及成年后可能的远期影响,亟需开发损伤更小甚至无创的检测方法以降低可能的影响;②目前PGS结果分析所需的时间超过24h,需要胚胎冷冻以选择合适时机移植,虽然现有研究显示新鲜胚胎和冷冻胚胎具有相似的妊娠结局[43],然而胚胎冷冻对胚胎发育的安全隐患一直是辅助生殖领域研究的焦点和热点,随着技术不断发展,缩短PGS出报告的时间,PGS2.0后新鲜囊胚的移植可能成为未来努力的方向;③现有PGS2.0检测技术都是基于全基因组扩增后的胚胎细胞DNA进行的分析,其分析的准确性有赖于扩增产物完整性,然而扩增偏倚无法消除,可能带来假阳性与假阴性,故目前定义的PGS仅是对非整倍体进行筛查,随着技术进步,是否可以扩大PGS的筛查范围,增加小片段重复缺失的筛查?④PGS2.0仍然无法预知嵌合体胚胎的结局,且PGS2.0对嵌合体的识别度可能较高,由于嵌合体胚胎可能发育成正常个体,也可能流产,嵌合体在所有早期异常核型流产中占比约2.88%[44],故难以界定嵌合体胚胎的妊娠结局,对嵌合体胚胎的移植前咨询成为目前难点,需要进一步研究。

6 PGS2.0展望

PGS目前争论焦点已从PGS是否对临床有利转而讨论扩大PGS指征的必要性。虽然目前仍缺乏多中心前瞻性随机对照研究证据的支持[45],仍需要重新认识和评估PGS,不可否认的是2010年后国际上大多数ART中心已将囊胚活检+PGS(PGS2.0)+FET作为常规手段运用于主要指征人群(AMA、RIF、RSA、男性因素),主要目的在于降低该人群流产风险,提高成功率,且显示较好的效果,国际社会对PGS的认同已全面恢复。PGS2.0已极大地改变了ART面

貌,可能成为未来生殖中心对所有患者的一个常规项目。

第三代试管婴儿PGD技术,究竟是怎样的技术

第三代试管婴儿是胚胎植入前遗传学诊断，简称PGD：是从已经受精并培养发育到有8个细胞的胚胎中，取出一个细胞，进行细胞遗传学或分子遗传学检查，如果确定胚胎没有遗传性疾病，再将这个胚胎移植入母体的子宫内，以达到优生优育的目的。

第三代试管婴儿技术在生物遗传学的角度来看，无疑是取得了革命性的突破，它能帮助人类有选择的生育最健康的后代，为有遗传病的准爸妈提供了生育健康孩子的机会。它是试管婴儿技术的推进和完善，也能从某种程度上增加试管婴儿治疗的成功率。

人类某些遗传病，如X性连锁疾病，是有选择地在不同性别的后代身上发病的。以血友病的男性患者为例，一般来说他如果生下的是儿子，那么带病的几率很小，而如果后代是女儿，那么孩子携带血友病基因的概率会达到一半(血友病基因携带者不一定会发病);在来说说血友病女性患者，她的儿子发病率极高，而她的女儿携带血友病基因的概率就是50%左右。而我们了解这种遗传病的特征，在进行试管婴儿治疗时，就可以对培育的胚胎细胞进行基因检测，选择健康的胚胎植入子宫，从而避免生出有遗传病的孩子。

通过以上的介绍，相信大家对第三代试管婴儿技术已经有所了解了，其实并非每位不孕不育患者都需要进行第三代试管婴儿的治疗，大家最好听从专家建议，找到最适合自己的治疗方案。

第三代试管婴儿PGD可以在哪里做

PGD技术的实验条件要求非常高,操作过程中的任何一个小的失误均可导致严重的临床后果。国内部分医院可进行PGD操作，但是只是限于一部分疾病的筛查，全部的基因病及染色体疾病高达125种，目前全世界只有美国可以做到全面筛查。

从安全性和健康性来说，美国的PGD技术是最保险的。正常操作的PGD并不会导致先天缺陷或染色体变异的增加，PGD在胚胎的基因物质活跃之前开始进行，胚胎里面的所有细胞是相同的，并且每个细胞都能够发育成为胎儿的任何部分，提取作为检测的那1个细胞并不会产生任何影响。但是技术不够完善的地方，则很有可能在提取细胞的时候出现纰漏，导致胚胎/囊胚的活性降低甚至死亡。美国一流生殖中心医学博士DR.Richard Buyalos提示，即便是美国做PGD筛查，这项技术也并非每个地方都可以进行，而是只限于美国少数几个大型实验室具备操作资格，患者不可听信部分机构的包装说辞。

由于目前的社会趋势，晚婚晚育的人群越来越多，大龄产妇人数也居高不下。而随着年龄增长、生活环境的恶化，染色体出现异常的现象越来越频繁，一旦胚胎携带染色体疾病，很可能在发育期间即出现停育，或者产妇在自然妊娠后分娩出18-3体和21-3体愚型儿，在这样的大环境下，第三代试管婴儿PGD技术的重要性可见一斑。在第一代与第二代的基础上，第三代试管婴儿起着非常重要的作用，淘汰疾病囊胚，选择健康优质囊胚的植入，可大大提高妊娠成功率，同时保障孩子出生后是健康婴儿，达到优生的效果。

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