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三步平衡法
(1)10%甘油保存液的配制
取9毫升20%羊血清的PBS,加入1毫升甘油,用吸管反复混合15~20次,经0.22微米滤器过滤到灭菌器内待用。
(2)取含20%羊血清0.3摩尔蔗糖的PBS 2毫升和3.5毫升,分别加入10%甘油3毫升和1.5毫升,配成含6%和3%甘油的蔗糖冷冻液。将3%、6%和10%三种甘油浓度的冷冻液分别装入小培养皿。
(3)胚胎分别在3%、6%和10%甘油的冷冻液中浸5分钟。
(4)胚胎装管
用0.25毫升塑料细管按以下顺序吸入,少量的10%甘油的PBS液、气泡、10%甘油的PBS液(含有胚胎)、气泡、少量的10%甘油的PBS液,加热封口两道(图9-18)。
图9-18胚胎装管示意图
(5)塑料细管的编号
剪一段(2厘米)0.5毫升塑料细管作为标记外套,内装色纸,注明供体品种、耳号、胚胎发育阶段及等级、制作日期(年、月、日),并在外套管上写明序号备查。
(6)冷冻程序
将细管直接浸入冷冻仪的酒精浴槽内,以1℃/分钟的速度从室温降至-6℃,停5分钟后植冰,再停留10分钟,以0.3℃/分钟的速度降至-36℃,再以0.1℃/分钟的速度降至-38℃,直接投入液氮,长期保存。
(7)冷冻胚胎的解冻
①解冻液的配制根据上文所述配制出10%、6%和3%甘油的蔗糖解冻液,用0.22微米过滤器灭菌,分装在小培养皿内,第1~4杯分别为10%、6%、3%、0%甘油的蔗糖解冻液,第5杯为PBS保存液。
②胚胎的解冻胚胎从液氮中取出,在3秒钟内投入38℃水浴,浸10秒钟。
③三步脱甘油用70%酒精棉球擦拭塑料细管和剪刀刃,剪去棉塞端,与带有空气的1毫升注射器连接。再剪去细管的另一端,在室温下将胚胎推入10%甘油和0.3摩尔蔗糖的PBS解冻液中,放置5分钟后依次移入6%、3%和0%甘油的蔗糖PBS解冻液中,各停留5分钟,最后移至PBS保存液中镜检待用。
冻胚比较好。
鲜胚还是冻胚移植,其实这种两种方法没有好坏之分。选择哪一种方法,要在取出卵子后,再次检查女性子宫才能确认是鲜胚还是冻胚移植。事实上,胚胎在新鲜周期植入,并不一定会增加成功着床的机率。
顺利怀孕除了胚胎本身的品质,子宫内膜的接受度也是很重要的。在新鲜植入周期中,因为在取卵前都有使用大量诱导排卵的药物,所以身体的贺尔蒙浓度都会远高于一般生理状态,而这些贺尔蒙浓度过高时可能会造成子宫内膜提早成熟,子宫内膜基因表现改变等现象,可能影响胚胎着床。
扩展资料:
对不孕症病人进行“试管婴儿”的疗程中,一般会借助促排卵药物的刺激来增加成熟卵子数,往往可使卵巢一次生长十个以上的卵子。但实际上在每一次的“试管婴儿”疗程中,只有1-3个胚胎移植回子宫腔。植入过多的胚胎可能增加多胞胎的危险性,因此剩余的胚胎可进行冷冻保存。
如果在治疗的周期没有成功,保存的胚胎可以在以后的自然排卵周期或激素替代周期移植回母体,不必再进行超排卵,不但可免除打针的痛苦,也可节省不少费用。
参考资料来源:百度百科-冷冻胚胎
冷冻胚胎是保存生育功能的唯一成熟方法。冷冻胚胎的技术是将通过试管培育技术得到的胚胎,存置于零下196℃的液氮环境中,得到长时间保存。如果这个周期治疗失败,可以在以后的自然周期中解冻这些胚胎并进行移植。
将胚胎和冷冻液装入冷冻管中,经过慢速(第2-3天的胚胎)和快速(第5-6天的囊胚)两种降温方式使胚胎能静止下来并可在196度的液氮中保存的一种方法。若有剩余的质量较好的胚胎,可以冷冻保存,待以后自然周期或人工周期解冻后植入子宫腔内,将增加受孕的机会。
可用于一个超排卵周期得到的胚胎数量多,质量好,不能一次全部移植,可将多余的冷冻胚胎保存,以及发生严重卵巢过度刺激综合证的患者,不宜在治疗周期移植胚胎者,可将冷冻胚胎,待以后的自然周期或人工周期进行胚胎复苏移植。冷冻胚胎复苏临床妊娠率为48.28%,囊胚冷冻复苏临床妊娠率为63.48%。
扩展资料
冷冻胚胎的适用对象(适应症):
1、IVF(ICSI)治疗周期过程中胚胎移植后剩余可以利用的胚胎;
2、本治疗周期母体因子宫环境不适合怀孕(例如:发生严重卵巢过度刺激征或子宫内膜不佳等),也可先冷冻保存暂缓植入,待适当的时机再做解冻;
3、本治疗周期有发热、腹泻等全身性疾病不能移植的;
4、对于有可能丧失卵巢机能的病人(例如:要接受化学治疗、放射线治疗或切除手术等),也可选择冷冻胚胎来保存其生育能力。
参考资料来源:百度百科—冷冻胚胎
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