维生素d不到20 可以胚胎移植吗，三级胚胎移植成功率20都不到吗

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药流后20天可以清宫吗

药流好。人工流产和药物流产相比较，药物流产的过程中没有器械进入子宫内，流产后引起感染的可能性比较小，并且子宫内膜受伤的可能性也小。人工流产的过程中吸引器要进入子宫腔内，还要刮出子宫内壁的附着物，操作的医生如果经验丰富，是不会伤及子宫内膜的，但是如果操作不当会损伤子宫内膜。子宫内膜就好像是“田地”一样，如果子宫内膜伤痕累累，将来“种子”可能就没有了生长发育的“土壤”。想做药物流产的关键是要早，所以生理周期有规律的人，怀孕后能即时发现。药物流产的适用时间在怀孕的早期（从末次月经的第一天算起的39～49天之中）。在进行药物流产之前，一定要做B超检查，首先要排除宫外孕的可能；其次要测量胎囊的大小，胎囊超过2．3厘米的不适合做药物流产。另外，药物流产的整个过程比较长，需要先服药2、3天，流产当天再在医院服用开宫口药物后，在医院观察若干小时，由医生确认胎囊是否排出体外。还有一点要提醒大家注意的是：药物流产有5％的失败率，如果不成功，还需要做人工流产补救。药物流产后的出血时间比较长，如果连续出血超过1周一定要即时到医院就诊，请医生帮助解决。自己服用药物进行流产是很危险的。不管是用哪一种方法，都要在正规的医院（规定二级甲等以上的医院才有资格进行这类手术）进行，千万不能在不具备执业条件的小诊所进行。否则可能由于炎症引起输卵管堵塞，导致不孕的严重后果。价格药流加上开的补药大概300-400，人流大概400-500了，这个价格也分医院，但是差不了太多。人流在医院只需20分钟左右即可，而且不管人流还是药流，最好都休息一个月为佳，做完人流要注意不可受风，不可吃凉的刺激性食物，不可洗澡，以免感染，不可干体力活，总之就是好好休息。还有一个是宫腔镜取胚术，宫腔镜取胚术是一种在可麻醉下经阴道将宫腔镜置入宫腔，直视下通过操作孔取出胚胎及附属组织，再经导管冲洗双侧输卵管，最后用气囊压迫宫腔止血。该手术直视、无痛、微创，集诊断治疗为一体，有效防止子宫穿孔、人流不全、继发不孕及习惯性流产。此术式出血少，不需休息、不住院，15分钟完成手术全过程，尤其适合有生育需求的年轻女性。宫腔镜取胚术可取代传统的人工流产、药物流产和钳刮术（妊娠超过人流时限），尤其适合早早孕、未生育过的病人和习惯性流产（RSA）。对未生育者可避免人流术中“盲刮”而致的子宫内膜的损伤；对反复自然流产、胎停育者，可在取出胚胎的同时查找或排除胎停育的宫腔病因，为进一步治疗习惯性流产铺平道路。生活中不少孕妇为了个人方便，尝试着使用药物流产。由于缺少了解这方面知识，往往达不到其效果，且有的流产进行到一半时“功亏一篑”，再去医院刮宫。药物流产究竟适用于哪些人，专家们认为应了解这些知识。什么是药物流产药物流产就是不用人工负压吸引手术，而是通过内服或外用药物，使妊娠自行结束的方法。常说的药物流产是指孕早期（怀孕七周内）采用以米非司酮为主的流产方法。米非司酮为抗孕激素类药物，其主要功能是作用于子宫内膜，导致胚胎组织坏死，并激发前列腺素产生，引起子宫、肠管等平滑肌的强烈收缩，使得新生的胚胎像刚出生的幼苗一样被连根拔掉，并迅速由子宫腔经阴道排出。药物流产适应于确诊为早孕49天以内，年龄在40岁以下，对人工流产手术恐惧的孕妇；或经医生检查不宜进行人工流产手术的高危妊娠，如产后、近期做过人工流产、一年内流产两次、子宫畸形、生殖道畸形的孕妇。若有糖尿病、甲状腺疾病、高血压、血液病、心脏病、哮喘、青光眼、过敏体质、带环妊娠、每天吸烟10支以上或嗜酒的孕妇不适宜药物流产。怎样进行药物流产 1．到医院妇产科进行全身体检和妇科检查、妊娠试验，对阴道清洁度、滴虫和霉菌、血常规和血型进行实验室化验检查，医生认为必要时应做B超检查。 2．记住医生交代的用药方法，药物的功效和可能出现的副作用。 3．用药方法 1）空腹或饭后2小时口服米非司酮25毫克，每日2次，连服3日。每次服药后2小时内不吃食物。第4日由医生于阴道后穹隆处放置卡孕栓1枚（1毫克），卧床休息2小时；或口服米索前列醇0.6毫克，住院或门诊观察6小时。 2）空腹或饭后2小时一次口服米非司酮200毫克，服药后禁食2小时，第3日或第4日早晨由医生于阴道后穹隆处放置卡孕栓（PG05）1枚（1毫克），卧床休息2小时，或服米索前列醇0.6毫克，住院或门诊观察6小时。 4．按上述办法服药后，应密切注意孕妇血压、脉搏，有无腹痛、腹泻和出血等副作用；专人监护检查胎囊排出时间，是否完整，出血多少；若观察6小时后胎囊仍未排出者，出血不多，孕妇愿意回家的，可以在家属陪护下回家。如在家中排出胎囊后，应拿到医院由医生检查是否完整。 5．若观察6小时出血过多，并有腹痛、血压下降等情况，应继续住院观察，以便采取必要的措施。为啥不要私自买药堕胎虽然药物流产方法比较简单，但亦有其副作用，甚至会发生异常情况。因此不能像感冒发烧，自己随便买几片APC，或者熬点红糖姜汤发发汗那样简单。想采用药物流产者，一定要到有血源、能输血、妇产科医生技术比较好的医疗保健机构去做，千万不要图省事，或怕羞，自己买药堕胎，这是为什么呢？ 1．药物流产有三种结局：一是完全流产，就是服药后自然排出胎囊，阴道出血自然停止，月经正常来潮；二是不完全流产，用药后未见胎囊排出，或排出不完整，这种情况必须再进行刮宫处理：三是流产失败，用药8天后未见胎囊排出，经B超检查证实宫中仍有妊娠物，这种情况必须用负压吸引人工流产术进行处理。如私自买药堕胎发生不全流产和失败，将会给孕妇造成很大的危害。若及时去医院治疗，很可能危害小些，若耽误了时机，特别是大出血不止，失去了输血的机会，性命难保。 2．流产药物都有一定的副作用，有的人反应轻，有的人反应重，若反应重的孕妇，不及时处理，很可能危及生命。 3．药物流产有很强的适应症，私自买药的人并不了解这些适应症，不适合药物流产的人自己买药堕胎非常危险。因此药物流产必须到正规医疗保健机构，必须在专门妇产科医生指导下进行。意外怀孕怎么办？无痛人流解忧愁妇科专家说，人工流产主要适合于因避孕失败而要求终止妊娠者，由于各种疾病而不宜继续妊娠者。但对于各种疾病的急性期或严重的全身性疾病，需待治疗好转后住院手术；生殖器官急性炎症；妊娠剧叶酸中毒尚未纠正者；术前两次体温大于37.5℃的患者是不宜行人工流产术的，一般10周内的患者用负压吸引术，11－14周时，因胎儿较大，需作钳刮或吸宫终止妊娠，由于现在很多医院都推出无痛人流技术，所以人流综合症出现的机会相比以前更少了，但由于操作医生的经验和水平有差异，所以仍然会出现吸宫不全、漏吸、出血、感染甚至不孕等现象。可喜的是，医院成功地将“无痛人流术”应用于临床，不仅为育龄妇女解决了肉体上的痛苦和心灵上的恐惧，更因术中的平稳安全，有效避免了诸多并发症。进行无痛人流，受术者只是轻轻松松小睡一觉，醒来时手术已经完成；实际的手术时间仅仅1-2分钟！受术者没有任何痛感，也就没有精神紧张；受术者的宫颈保持在松弛状态，极有利于医生操作，避免了无谓的损伤；镇痛所用的药物代谢迅速，仅5-8分钟即可排泄，因此对身体不会有任何副作用。整个过程安全、可靠。以下的原则，如果好好遵守，流产手术是一个相当安全的手术：使用无痛式、吸引式，不要使用「搔括」，以免形成子宫内粘连、不孕症。术前空腹8小时。安全麻醉，如短超效巴比妥盐。术前一定要用超音波确认：妊娠囊在子宫内，无外孕之虞及确定子宫轴向。一定要有家属、朋友作伴。手术后8小时内精神状况同酒醉，不可开车。醒过来之后(约5~10分钟)可喝少量水，不觉恶心再进食。术后隔天要回医院用超音波确认子宫收缩良否？医生开立的抗生素一定要按时服用，以免骨盆腔炎(P.I.D.)或子宫内膜炎(Endometritis)。月经会延迟10至20天左右，若延迟太久，如1个月，就要找医生检查了。术后一周内禁欲，要「戒急用忍」以免子宫内膜炎、阴道炎。理论上术后与生产后一样，有一阵子卵巢处于「休兵」状态，不可能受孕，但仍请你做好「防范」措施，不要不信邪。一位技术触好的妇产科医师，手术时间只要1到2分钟，休息半小时即可回家，你如果要「补充营养」可交代院方加打点滴。流产手术后，有少数人子宫内膜细胞复原慢，会点状出血，你会滴滴答答，没关系回去找原来的医师开个荷尔蒙，立即可以解决，不必一天到晚唱：「最近有点烦!!」掌握以上原则，流产手术是一相当安全的手术，但有两种状况虽罕见，仍具危险，需特别注意：对麻醉药过敏者。子宫内、子宫外同时怀孕的机率为三万分之一。

胎生动物可以体外受精吗

体外受精(In Vitro Fertilization)或（external fertilization）是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分，又简称为IVF-ET。在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。这项技术成功于20世纪50年代，在最近20年发展迅速，现已日趋成熟而成为一项重要而常规的动物繁殖生物技术。

体外受精技术对动物生殖机理研究、畜牧生产、医学和濒危动物保护等具有重要意义。如用小鼠、大鼠或家兔等作实验材料，体外受精技术可用于研究哺乳动物配子发生、受精和胚胎早期发育机理。在家畜品种改良中，体外受精技术为胚胎生产提供了廉价而高效的手段，对充分利用优良品种资源，缩短家畜繁殖周期，加快品种改良速度等有重要价值。在人类，IVF-ET技术是治疗某些不孕症和克服性连锁病的重要措施之一。体外受精技术还是哺乳动物胚胎移植、克隆、转基因和性别控制等现代生物技术不可缺少的组成部分。

一、体外受精技术的发展简史

早在1878年，德国人Scnenk就以家兔和豚鼠为材料，开始探索哺乳动物的体外受精技术，但一直没有获得成功。直到1951年，美籍华人张明觉和澳大利亚人Austin同时发现了哺乳动物的精子获能现象，这一领域的研究才获得突破性进展。 1959年，张明觉以家兔为实验材料，从一只交配后12h的母兔子宫中冲取精子(即体内获能的精子)，从另外两只超数排卵处理母兔的输卵管中收集卵子，精子和卵子在体外人工配制的溶液中完成受精过程，然后，正常卵裂的36枚胚胎被移植到6只受体的输卵管中，其中4只妊娠，并产下15只健康仔兔，这是世界上首批试管动物，它们的正常发育标志着体外受精技术的建立。

20世纪60年代初至20世纪80年代中期，人们以家兔、小鼠和大鼠等为实验材料，进行了大量基础研究，在精子获能机理和获能方法方面取得很大进展。精子由最初在同种或异种雌性生殖道孵育获能，发展到用子宫液、卵泡液、子宫内膜提取液或血清等在体外培养获能，最后用化学成分明确的溶液培养获能。同时，通过射出精子和附睾精子获能效果的比较研究，人们发现射出精液中含有去能因子，并认识到获能的实质是去除精子表面的去能因子。这些理论和方法上的成就，推动了体外受精技术的发展，试管小鼠(Whit-tingham，1968)、大鼠(Toyoda和Chang，1974)、婴儿(Steptoe和Edwards，1978)、牛(Brackett等，1982)、山羊(Hamda，1985)、绵羊(Hanada，1985)和猪(Chang等，1986)等相继出生。

20世纪80年代中期以后，以牛为代表的家畜IVF技术发展迅速，1986年Parrish等用含肝素的介质处理牛的冷冻精液，然后与体外成熟的卵母细胞体外受精获得成功。这对牛IVF的研究和应用具有重要意义，因为这种方法可利用屠宰场废弃的卵巢和冷冻精液进行胚胎体外生产，不仅成本低廉，而且效果稳定。此后，牛的卵母细胞体外成熟和胚胎培养体系逐步趋于成熟，胚胎体外生产效率得到很大提高。目前，采用IVF-ET技术，每对废弃的牛卵巢可获得3头左右的犊牛。为充分利用良种母牛的遗传资源，20世纪80年代后期，牛的活体取卵技术（Ovum pick UP.OPU）发展迅速。活体取卵和IVF-ET结合已成为欧、美和大洋洲等畜牧业发达国家的农场主为扩大良种母牛群选择的重要繁殖技术。

牛的体外受精技术不仅应用于畜牧生产，同时，也成为研究其他胚胎生物技术，如克隆、转基因、胚胎干细胞分离培养和性别控制等的重要辅助手段。

二、体外受精技术的基本操作程序

哺乳动物体外受精的基本操作程序，主要环节包括以下几个方面:

(一)卵母细胞的采集和成熟培养

1．卵母细胞的采集：卵母细胞的采集方法通常有三种。

(1)超数排卵：雌性动物用促卵泡素和促黄体素处理后，从输卵管中冲取成熟卵子可直接与获能精子受精。在大家畜中，由于操作程序复杂，成本较高，很少使用。这种方法的关键是掌握卵子进入输卵管和卵子在输卵管中维持受精能力的时间，一般要求在卵子具有旺盛受精力之前冲取。

(2)从活体卵巢中采集卵母细胞：这种方法是借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。

在家畜中，牛和马等大家畜常用超声波探测仪辅助取卵，其方法是用手从直肠把握卵巢，经阴道壁穿刺插入吸卵针，借助B型超声波图像引导，吸取大卵泡中的卵母细胞。按照目前的技术水平，一头健康母牛每周可获得5~10枚卵子。在家畜中，活体采集的卵母细胞一般要经成熟培养后才能与精子受精。这种方法对扩繁优良母畜具有重大意义，在有些国家已用于商业化生产。

(3)从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞：这种方法是从刚屠宰母畜体内摘出卵巢，经洗涤、保温（30℃~37℃)后，快速运到实验室，在无菌条件下用注射器或真空泵抽吸卵巢表面一定直径卵泡中的卵母细胞（牛卵泡直径要求3-10mm）也可对卵巢进行切片，收集卵母细胞。用此方法获得的卵母细胞多数处于生发泡期(GV期)，需要在体外培养成熟后才能与精子受精。从废弃卵巢中采集卵母细胞的关键是注意卵巢的保温和防止细菌污染。因此卵巢从畜体摘取后须放入含有生理盐水或磷酸缓冲液（PBS）的保温瓶中；吸卵前卵巢要用生理盐水或PBS多次洗涤；所用溶液都要添加抗生素。

这种方法的最大优点是材料来源丰富，成本低廉，但确定母畜的系谱困难。

2．母细胞的选择：采集的卵母细胞绝大部分与卵丘细胞形成卵丘卵母细胞复合体（cumulus oocyte complesx COC）。无论采用何种方法，采集的COC都要求卵母细胞形态规则，细胞质均匀，外围有多层卵丘细胞紧密包围。在家畜体外受精研究中，常把未成熟卵母细胞分为A、B、C和D四个等级。A级卵母细胞要求有三层以上卵丘细胞紧密包围，细胞质均匀；B级要求卵母细胞质均匀，卵丘细胞层低于三层或部分包围卵母细胞；C级为没有卵丘细胞包围的裸露卵母细胞；D级是死亡或退化的卵母细胞。在体外受精实践中，一般只培养A级和B级卵母细胞。

3．卵母细胞的成熟培养：由超数排卵采集的卵母细胞已在体内发育成熟，不需培养可直接与精子受精，对未成熟卵母细胞需要在体外培养成熟。培养时，先将采集的卵母细胞在实体显微镜经过挑选和洗涤后，然后放入成熟培养液中培养。家畜卵母细胞的成熟培养液目前普遍采用TCM199添加孕牛血清、促性腺激素、雌激素和抗生素成份。通常采用微滴培养法，微滴体积为50-200微升，每滴中放入的卵母细胞数按每5微升一个计算单位。卵母细胞移入小滴后，放入二氧化碳培养箱中培养，培养条件为39℃、100%湿度和5%二氧化碳的空气。牛的培养时间为20-24小时，卵丘卵母细胞复合体经成熟培养后，卵丘细胞层扩散靠近卵母细胞周围的卵丘细胞呈放射状排列，出现放射冠，用DNA特意性染料染色后，在显微镜下进行核相观察，可见卵母细胞处于第2次成熟分裂中期。

(二)体外受精

1．精子的获能处理：哺乳动物精子的获能方法有培养和化学诱导两种方法。牛、羊的精子常用化学药物诱导获能，诱导获能的药物常用肝素和钙离子载体。

2．受精：即获能精子与成熟卵子的共培养，除钙离子载体诱导获能外，精子和卵子一般在获能液中完成受精过程。受精培养时间与获能方法有关。在B2液中一般为6-8小时而用TALP或S.F液作受精液时可培养18~24h。精子和卵子常在小滴中共培养，受精时精子密度为1~9×10 6/ml，每10微升精液中放人1~2枚卵子，小滴体积一般为50~200微升。

(三)胚胎培养

精子和卵子受精后，受精卵需移入发育培养液中继续培养以检查受精状况和受精卵的发育潜力，质量较好的胚胎可移入受体母畜的生殖道内继续发育成熟或进行冷冻保存。

提高受精卵发育率的关键因素是选择理想的培养体系。在家畜中，胚胎培养液分为复杂的和化学成分明确的培养液两大类。复杂培养液中的成分很多，除无机和有机盐外，还添加维生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等营养成分和血清，最常用的有TCM199、B2和F10。用它们培养胚胎时，可以采用体细胞共培养体系，即体细胞与胚胎在微滴中共同培养，利用体细胞生长过程中分泌的有益因子，促进胚胎发育，克服发育阻断。

受精卵的培养广泛采用微滴法，胚胎与培养液的比例为一枚胚胎用3~10微升培养液；一般5~10枚胚胎放在一个小滴中培养以利用胚胎在生长过程中分泌的活性因子，相互促进发育。胚胎培养条件与卵母细胞成熟培养条件相同。有的实验室采用88% N2、7% O2和5%二氧化碳混合气体培养，以降低培养液中氧自由基浓度，提高胚胎发育率。胚胎在培养过程中要求每48-72小时更换一次培养液，同时观察胚胎的发育状况。当胚胎发育到一定阶段时可进行胚胎移植或冷冻保存，牛、羊受精卵通常培养到致密桑椹胚或囊胚时进行移植或冷冻保存。

三、家畜体外受精技术的发展现状和存在的问题

(一)发展现状：家畜体外受精技术经过近20年的发展，已取得很大进展，其中牛的IVF水平最高，入孵卵母细胞(即进入成熟培养)的卵裂率为80%~90%，受精后第七天的囊胚发育率为40%~50%，囊胚超低温冷冻后继续发育率为80%，移植后的产犊率为30%~40%.平均每个卵巢可获得A级卵母细胞10个左右，经体外受精可获得3~4个囊胚，移植后产犊1~2头。

(二)存在的问题和发展方向

1．存在的问题

(1)囊胚发育率低，细胞数少。体外受精卵在培养过程中普遍存在发育阻断(developmental

block)，即胚胎发育到一定阶段后停止发育并发生退化的现象。牛胚胎阻断发生在8~16细胞阶段，这就导致体外受精卵的囊胚发育率远低于体内受精。此外，与体内受精囊胚相比，体外受精囊胚的细胞总数和内细胞团细胞数明显减少。

(2)产犊率低，胎儿初生重高。家畜体外受精胚胎，特别是牛的IVF胚胎移人受体后，产犊率比体内受精低15%~20%，但胎儿初生重比人工授精后代高3~4kg，导致受体母畜难产率高。

2．发展方向

(1)深入研究卵母细胞成熟和胚胎发青的分子机理体外受精效率低的主要原因是人

们对卵子发生和胚胎发育的分子机理了解不够。大幅度提高IVF效率的前提是探明卵母细胞和早期胚胎发育的分子调控机理，然后以此理论为指导，研究理想的培养体系，促使胚胎基因组得到稳定、有序表达.

(2)加强腔前卵泡培养的研究，利用优良母畜的遗传资源目前IVF技术利用的卵母细胞不足家畜卵巢上卵母细胞总数的千分之一。为此，一方面提高活体取卵技术，另一方面需研究腔前卵泡和小卵泡的体外成熟技术。为保证卵母细胞的稳定来源及良种母畜或濒危动物的保种，卵泡和卵母细胞的超低温冷冻保存技术的研究也必须加强。

(3)加强体外受精与其他生物技术的结合。体外受精与转基因、克隆、性别控制及胚胎干细胞的培养密不可分。通过体外受精可为外源基因的导人提供充足的胚胎来源；为克隆技术提供成熟卵母细胞和克隆胚胎的培养体系；用分离的X和Y精子与卵子体外受精，可对哺乳动物进行性别控制。同样，胚胎干细胞的分离也需要IVF技术提供胚胎和培养体系。这些生物技术的综合发展将对人类生活产生重大影响.

四、辅助受精技术

辅助受精技术(Techniques f.r assisted fertilizati.n)是IVF的延伸，它是通过人为方法使精子和卵子完成受精过程，克服在某些情况下精子不能穿过透明带和卵黄膜的缺陷。这项技术起源于20世纪60年代，20世纪80年代得到迅速发展，在医学上已成为治疗某些男性不育症的主要措施之一；在基础生物学中，它对研究哺乳动物受精和发育机理有很重要的价值；它还对挽救濒危动物和充分利用优良种公畜等有重要意义。目前哺乳动物的辅助受精技术有透明带修饰和精子注人两种方法。由于两种方法都需要借助显微操作仪来完成，所以又称辅助受精技术为显微授精(microinsemination)。

(一)透明带修饰法：它是运用物理或化学方法对卵母细胞的透明带进行打孔、部分切除或撕开缺口，为精子进入卵黄周隙打开通道，然后把卵子与一定浓度的精子共培养以完成受精过程.这种方法适用于具有一定运动能力，但顶体反应不全，无法穿过透明带的精子。它的优点是对卵子的损伤小，但对于靠透明带反应阻止多精入卵的动物易造成多精子受精，影响胚胎继续发育。目前这种方法仅在小鼠中取得成功。

(二)精子注入法：它是利用显微操作仪直接把精子注入卵黄周隙或卵母细胞的胞质中，前者称透明带下授精(subzonal inseminatiom SUZI)，后者称胞质内精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)。透明带下授精对注入的精子数有严格要求：具有活力且已发生顶体反应的精子要单个注入；没有发生顶体反应的精子，注入的数目可加大。SUZI的优点是对卵母细胞的损伤小，已在临床医学上得到运用，但多精入卵是制约这一技术发展的主要原因。胞质内精子注射对精子活力、形态和顶体反应没有特殊要求，只需注入单个精子即可，为提高受精率，注射后卵子需要人为激活。胞质内注射精子作为治疗男性受精障碍症的方法已在许多国家得以应用，由此获得的试管婴儿数已超过3000例。

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