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三步平衡法
(1)10%甘油保存液的配制
取9毫升20%羊血清的PBS,加入1毫升甘油,用吸管反复混合15~20次,经0.22微米滤器过滤到灭菌器内待用。
(2)取含20%羊血清0.3摩尔蔗糖的PBS 2毫升和3.5毫升,分别加入10%甘油3毫升和1.5毫升,配成含6%和3%甘油的蔗糖冷冻液。将3%、6%和10%三种甘油浓度的冷冻液分别装入小培养皿。
(3)胚胎分别在3%、6%和10%甘油的冷冻液中浸5分钟。
(4)胚胎装管
用0.25毫升塑料细管按以下顺序吸入,少量的10%甘油的PBS液、气泡、10%甘油的PBS液(含有胚胎)、气泡、少量的10%甘油的PBS液,加热封口两道(图9-18)。
图9-18胚胎装管示意图
(5)塑料细管的编号
剪一段(2厘米)0.5毫升塑料细管作为标记外套,内装色纸,注明供体品种、耳号、胚胎发育阶段及等级、制作日期(年、月、日),并在外套管上写明序号备查。
(6)冷冻程序
将细管直接浸入冷冻仪的酒精浴槽内,以1℃/分钟的速度从室温降至-6℃,停5分钟后植冰,再停留10分钟,以0.3℃/分钟的速度降至-36℃,再以0.1℃/分钟的速度降至-38℃,直接投入液氮,长期保存。
(7)冷冻胚胎的解冻
①解冻液的配制根据上文所述配制出10%、6%和3%甘油的蔗糖解冻液,用0.22微米过滤器灭菌,分装在小培养皿内,第1~4杯分别为10%、6%、3%、0%甘油的蔗糖解冻液,第5杯为PBS保存液。
②胚胎的解冻胚胎从液氮中取出,在3秒钟内投入38℃水浴,浸10秒钟。
③三步脱甘油用70%酒精棉球擦拭塑料细管和剪刀刃,剪去棉塞端,与带有空气的1毫升注射器连接。再剪去细管的另一端,在室温下将胚胎推入10%甘油和0.3摩尔蔗糖的PBS解冻液中,放置5分钟后依次移入6%、3%和0%甘油的蔗糖PBS解冻液中,各停留5分钟,最后移至PBS保存液中镜检待用。
有一些小夫妻会因为婚后一直没能怀孕,选择去医院通过科学的手段进行人工取卵体外受精,然后再移植到妈妈体内,一般女性在进行取卵手术后,胚胎需要进行冷冻,那么取卵后冻胚是什么意思呢?
目前,冷冻胚胎是世界上唯一成熟的保存生育功能的方法。全面二孩”政策放开后,不少夫妇想唤醒冷冻胚胎来生二胎,首先来说说什么是冻胚移植,首先冻胚可以是鲜胚和囊胚,一般会将筛选出来后符合条件的胚胎封存于-196℃液氮中,以极短的时间让囊胚处于休眠状态,用先进的冷冻技术将其冷冻保存起来,根据需求将其进行解冻。
冻胚的要求比较好,如果医生确定其胚胎质量非常好,那么它就适合冷冻,冷冻后的胚胎不会继续生长发育、不会衰老,且复苏后同样有较高的试管婴儿成功率。这样高质量的胚胎冷冻保存后,等到以后自然周期或人工周期解冻后植入子宫腔内,这时就叫冻胚移植。但是需要注意的是冷冻和解冻的过程中,可能会降低胚胎的活性。
虽然冻胚移植的费用相对会高一些,但优势在于冻胚移植的时间不会很赶,可以根据不同身体条件的女性个性化制定移植时间,再有就是综合各方面来看,可能冻胚移植成功率会相对高一些,以下是具体的流程:
冷冻胚胎移植的过程其实相比鲜胚多了一个冻融的过程,除此之外子宫内膜的准备与胚胎的发育、子宫内膜的同步化是融解胚胎移植后妊娠成功与否的重要条件。
1、首先是冷冻胚胎,部分有鲜胚移植条件的女性在进行移植后,会将剩下的胚胎放置在装有冷冻保护剂的玻璃瓶中,并置于液氮冷冻机中,让其冷却至-196℃。胚胎冷冻对于实验室设备要求比较高,因为建议选择正规大型医院进行;
2、然后在确定冻胚移植的时间时会进行胚胎解冻,在“冷冻胚胎”被唤醒后需要在模拟人体的环境下待上4个小时,只有胚胎重新适应熟悉的环境才能彻底满血复活,如果此时胚胎在解冻过程中受损,则放弃使用;
3、在进行冻胚移植前女性要调理好自己的身体和子宫内膜,尤其是对于子宫内膜的要求比较高,一般临床上主要通过自然周期法和激素替代法来做内膜的一些准备工作;
4、然后就是移植了,胚胎移植的过程基本都一样,这一过程只需几分钟,或十几分钟的时间,无痛,亦无需做麻醉。
以上就是冷冻胚胎移植的全流程,需要注意的是如果第一次冻胚移植失败的话,会调整方案进行第二移植,如果有剩余胚胎的话其移植的流程基本都是一样的,移植后会注射黄体酮保胎。
试管取卵打麻药吗?女性在做取卵手术的过程中会感到些疼痛感,大多数的情况下都是可以接受的。但是对于疼痛比较敏感的女性,就会采用无痛取卵的方式缓解疼痛。有些女性会选择打麻醉针减缓疼痛,但是担心对卵子质量产生影响。那么,试管取卵打麻药吗?
试管婴儿取卵时是否打麻药需视情况而定。试管婴儿也叫体外受精胚胎移植,第一步就是把卵子取出体外。
取卵是在阴道B超的引导下进行的,在B超经阴道的探头上套一个胶皮袋子,然后把穿刺针固定在探头上,在穿刺针的尾部接一个连着负压吸引器的胶管,把探头伸进阴道以后,B超的显示屏上会出现卵巢和卵泡的情况,根据显示屏上的卵泡情况移动穿刺针,逐个穿刺卵泡。
医生在取卵时,施行的是静脉麻醉剂,麻醉药通过静脉注射的给药途径,进入血液,进而达到手术部位发挥神经组织的作用,还有少部分病人是局部麻醉,即通过宫颈局部注射麻醉药的方法,减轻牵拉宫颈、扩张宫颈时引起的不适。
每个人的痛阈不一样,疼痛反应的程度也不一样。而取卵需不需要打麻药,各个生殖中心的做法也不一样,有的生殖中心不打麻药,只用一些镇静药,如地西泮和杜冷丁等,病人稍有不适,但也不会很痛苦,这可能与医生的手法、熟练程度和时间有关,有的中心则是在全麻下进行的无痛取卵术,这两种方法对身体的伤害很小。
冷冻胚胎是保存生育功能的唯一成熟方法。冷冻胚胎的技术是将通过试管培育技术得到的胚胎,存置于零下196℃的液氮环境中,得到长时间保存。如果这个周期治疗失败,可以在以后的自然周期中解冻这些胚胎并进行移植。
将胚胎和冷冻液装入冷冻管中,经过慢速(第2-3天的胚胎)和快速(第5-6天的囊胚)两种降温方式使胚胎能静止下来并可在196度的液氮中保存的一种方法。若有剩余的质量较好的胚胎,可以冷冻保存,待以后自然周期或人工周期解冻后植入子宫腔内,将增加受孕的机会。
可用于一个超排卵周期得到的胚胎数量多,质量好,不能一次全部移植,可将多余的冷冻胚胎保存,以及发生严重卵巢过度刺激综合证的患者,不宜在治疗周期移植胚胎者,可将冷冻胚胎,待以后的自然周期或人工周期进行胚胎复苏移植。冷冻胚胎复苏临床妊娠率为48.28%,囊胚冷冻复苏临床妊娠率为63.48%。
扩展资料
冷冻胚胎的适用对象(适应症):
1、IVF(ICSI)治疗周期过程中胚胎移植后剩余可以利用的胚胎;
2、本治疗周期母体因子宫环境不适合怀孕(例如:发生严重卵巢过度刺激征或子宫内膜不佳等),也可先冷冻保存暂缓植入,待适当的时机再做解冻;
3、本治疗周期有发热、腹泻等全身性疾病不能移植的;
4、对于有可能丧失卵巢机能的病人(例如:要接受化学治疗、放射线治疗或切除手术等),也可选择冷冻胚胎来保存其生育能力。
参考资料来源:百度百科—冷冻胚胎
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